Anatomia

Bioquímica

Reporte de la Novena Práctica de Laboratorio realizada el
29 de Octubre de 2012

“DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES EN ORINA”

Entrega: 05 de Noviembre de 2012

-------------------------------------------------
OBJETIVOS
Realizar la cuantificación de proteínas totales en una muestra de orina de 24 Horas.
Comprender la importancia de la valoración de la excreción deproteínas en orina en pacientes con alteraciones renales.
El alumno sera capaz de determinar los mg. De creatinina excretada en 24 Hrs.
-------------------------------------------------
INTRODUCCION
La principal función de los riñones es la depuración de la sangre mediante la formación de orina. Las unidades funcionales del riñón son las nefronas, unos sistemas compuestos por vasos sanguíneos,capilares glomerulares y túbulos, donde se desarrollan tres procesos básicos para la formación de la orina:
1. La filtración de la sangre que llega a los capilares glomerulares.
2. La reabsorción tubular de sustancias que no deben ser eliminadas.
3. La secreción tubular de sustancias que pueden sufrir también los dos procesos anteriores.

Del equilibrio de estos procesos dependerála correcta formación de orina que presente una composición, densidad, pH y volumen adecuados. En el laboratorio, la función renal se estudia mediante determinaciones realizadas en muestras de sangre y de orina recogida durante 24 horas
La orina de personas sanas no contiene proteínas o solo pequeñas cantidades; normalmente el glomérulo evita el paso de estas de la sangre al filtradoglomerular.
Alteraciones glomerulares causan el aumento de la permeabilidad de las proteínas plasmáticas, lo que ocasiona la proteinuria, que es la presencia de proteínas en la orina. Este resultado puede ser también una muestra del mal funcionamiento renal.
Toma de la muestra
* La correcta toma de muestra de orina de 24 horas debe realizarse desechando la primera micción de las 8:00 horas,recogiendo todas las micciones durante las 24 horas siguientes en un recipiente adecuado, hasta la micción de las 8:00 horas del día siguiente incluida.
* La muestra de orina para el estudio del sedimento debe ser la fracción media de una micción, recogida en un recipiente estéril.
El método turbidimétrico, se basa en la inhibición del crecimiento bacteriano indicado por la medición de la turbidez(transmitancia) de suspensiones de un microorganismo apropiado en un medio liquido al cual se le han agregado cantidades graduadas del compuesto a ensayar. Los cambios de transmitancia producidos por el compuesto de prueba se comparan con los producidos por concentraciones conocidas del material de referencia.
Fuente: http://www.cun.es/area-salud/pruebas-diagnosticas/analisis-la-funcion-renalhttp://www.carloshaya.net/biblioteca/contenidos/docs/nefrologia/predialisis/pacodiez.PDF

-------------------------------------------------
MATERIALES & REACTIVOS

*
* Tubos de ensayo de 10 ml, limpios y secos.
* Pipetas serológicas de 1 y 5 ml.
* Espectrofotómetro (luz visible).
*
Solución de acido sulfosalicílico al 3%.
* Agua destilada
* La orina colectaday almacenada bajo previas instrucciones a lo largo de 24 Hrs.

-------------------------------------------------
PROCEDIMIENTO
A) PROTEINAS TOTALES
1. Colocar el espectrofotómetro a 450 nm; ajustar a cero con el blanco de 1 ml de orina y 5 ml de agua destilada.
2. A 1 ml de orina de 24 Hrs añadir 5 ml de ácido sulfosalicílico al 3%.
3. Dejar en reposo durante 15 min.
4.Determinar la absorbancia a 450 nm.
Cálculos
Abs x 200 = mg de proteína/100 ml de orina
Volumen de orina en ml x mg de proteína en 100 ml = mg de proteína/24 Hrs
Valores normales: 10 mg/100 ml o hasta 150 mg/24 Hrs.
-------------------------------------------------
RESULTADOS

Volumen de orina colectada durante 24 hrs: 790 ml.
Valor en mg de proteína/100 ml: 12.8 mg de prot/100ml....