Antibiograma

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OBJETIVOS

Prueba de Difusión por Disco

Al finalizar este capítulo el lector deberá ser capaz de: • Enumerar los pasos requeridos para realizar una prueba de difusión por disco. • Mencionar las variables que deben ser controladas cuando se realiza la prueba. • Reconocer los problemas que podrían ocurrir si las variables de la prueba no son controladas apropiadamente. • Discutir los dosmétodos básicos de preparación del inóculo y la aplicación de cada uno de ellos. • Basado en las las recomendaciones de NCCLS, interpretar los diámetros de la zona de inhibición como sensible, intermedio o resistente para organismo/agente antimicrobiano específicos.

ANTECEDENTES
El principio de las pruebas de difusión por disco ha sido utilizado por más de 70 años en los laboratorios demicrobiología. Alexander Fleming utilizó una variante de esta técnica cuando trabajaba con la penicilina en los años cincuenta. En ese tiempo, había tantos procedimientos diferentes en uso como microbiólogos. Los doctores Bauer, Kirby, Sherris y Turck probaron minuciosamente todas las variables involucradas en el proceso, tales como los medios de cultivo, la temperatura y el espesor del agar. En 1966, ellospublicaron su estudio cimero describiendo la prueba que se usa en la actualidad. El NCCLS adoptó los pasos básicos del procedimiento descritos en el estudio de Bauer como el método de referencia para difusión por disco. Estos pasos deben seguirse en forma minuciosa para obtener resultados precisos.

CÓMO REALIZAR LA PRUEBA – REVISIÓN
Una vez que se han aislado colonias de un organismo que hasido identificado como patógeno potencial, es necesario proceder de la siguiente manera para realizar la prueba de susceptibilidad. 1. 2. 3. 4. Seleccionar las colonias Preparar una suspensión del inóculo Estandarizar la suspensión del inóculo Inocular la placa 39

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Metodos de Prueba

Figura 4.1—Seleccionando colonias bien aisladas para el inóculo 5. 6. 7. 8. Colocar discos de antimicrobianoIncubar la placa Medir las zonas de inhibición Interpretar los resultados

Seleccionar las Colonias
Uno de los pasos más importantes en el proceso de la prueba es la preparación del inóculo. Esto involucra la selección de colonias apropiadas para la prueba, su suspension en caldo y la estandarización de la suspensión. Primero, seleccione varias colonias del organismo que esté analizando. Siselecciona entre 3–5 colonias, en vez de solo una, sus chances de detectar resistencia son mayores. Nota: Utilizando una herramienta de inoculación (o un hisopo de algodón) recoga de la placa sólo colonias bien aisladas para evitar pruebas de cultivo mixto. Si no dispone de colonias bien aisladas, haga un subcultivo del organismo en una nueva placa.

Cómo Preparar y Estandarizar la Suspensión delInóculo
Existen dos métodos para la preparación de inóculo: suspensión directa de colonias y fase logarítmica de crecimiento. Sólo el método de suspensión directa de colonias proveerá resultados precisos para ciertos organismos. En ambos métodos, la turbidez de la suspensión debe ser estandarizada (para que sea igual) al estándar 0,5 de McFarland (lo que corresponde a aproximadamente 1,5 X 108CFU/ml). Las suspensiones así ajustadas deben utilizarse como inóculo dentro de los 15 minutos siguientes. Nota: Los estándares de McFarland están hechos ya sea de sulfato de bario o partículas de látex. Si usa sulfato de bario, agite antes de usar, si usa látex, invierta para mezclar. Una fórmula para el estándar 0,5 de McFarland se encuentra en el Apéndice.

Suspensión Directa de Colonias
Parael método de suspensión directa de colonias, las colonias no deben sobrepasar las 18–24 horas de aislamiento. Estandarice el inóculo al mismo tiempo que prepara

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Figura 4.2—Estandarización del Inóculo

la suspensión. Suspenda las colonias en solución salina o caldo (eje. Mueller-Hinton o soya tríptica). Luego, ajuste el inóculo a una turbidez...