Análisis De Artículos En Técnicas Analíticas
Páginas: 15 (3642 palabras)
Publicado: 1 de julio de 2012
TALLER
* Que se hizo, como se hizo y cuál fue el propósito de la medición.
* Ventajas y desventajas de los métodos utilizado.
* Conclusiones sobre los métodos y aspectos relevantes.
* Explicar el método electroforesis.
Explicar el método electroforesis:
La electroforesis es un método analítico –semipreparativo, usada para la separación de moléculas según la movilidad deestas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
Fundamentos de la electroforesis
La electroforesis es la migración de solutos iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico; Estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo (electrodos - y +), en dependencia de una 1Master en Ciencias Bioquímicas. Investigadora Agregada. combinación de su carga, peso molecular y estructura tridimensional.
Según la disposición del soporte puede ser horizontal o vertical. Mirar figuras.
Es de destacar que a escala analítica, los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad, poder de resolución y versatilidad, y sirven como método de separación de mezclas complejas deácidos nucleicos, proteínas y otras biomoléculas, donde aportan un potente criterio de pureza. Se pueden conocer también mediante estas técnicas, las características ácido-básicas de las proteínas presentes en un extracto crudo, lo que da la información necesaria si se pretende realizar una separación cromatográfica basada en diferencias de carga. Es útil además para determinar otros parámetros comopeso molecular, punto isoeléctrico y número de cadenas polipeptídicas de las proteínas.
La velocidad de migración (v) de la partícula es directamente proporcional al producto de su carga efectiva (q) y el gradiente de potencial eléctrico (E) e inversamente proporcional al coeficiente de fricción (f) relativo a la talla y forma de la molécula, o sea, a la resistencia que le ofrece el medio.
V= q E / f
La velocidad de migración electroforética depende de la densidad de carga de la molécula (relación carga / peso), del voltaje aplicado y de la porosidad del gel de electroforesis. El voltaje no se puede incrementar indiscriminadamente porque se genera un excesivo calor. En contraste, al aplicar bajo voltaje puede ocurrir una pobre separación, por causa de la difusión por tiempo muyprolongado de la corrida electroforética.
La mayoría de las biomacromoléculas (proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos) poseen determinada carga eléctrica con grupos aniónicos y catiónicos capaces de disociarse. La carga neta de la partícula está dada por el pH del medio y puede ser modificada por la interacción con pequeñas moléculas de iones u otras macromoléculas. De lo anterior se deduceque el pH influye sobre la velocidad de migración de las moléculas.2 En el punto isoeléctrico de la biomolécula, pH al cual su carga neta es 0, esta no migra. Por debajo del punto isoeléctrico tiene carga neta positiva y migra hacia el cátodo, y por encima del punto isoeléctrico tienen carga neta negativa y migra hacia el ánodo.
El soporte sobre el que tiene lugar el desplazamiento de lasespecies es un gel de poliacrilamida, este tipo de análisis se caracteriza porque:
* La migración es proporcional a la carga neta, el tamaño y la forma de la proteína
* Los geles son químicamente inertes, transparentes y estables en un amplio rango de pHs, temperatura y fuerza iónica
* Los geles de poliacrilamida (PAGE) se forman por la polimerización de la acrilamida por acción de unagente entrecruzador, la bis-acrilamida, en presencia de un iniciador (TEMED (N,N,N,N’-tetrametilnediamina) y como catalizador el ión persulfato (S2O8- ), que se añade en forma de persulfato amónico
En función del estado de las proteínas (nativo o desnaturalización) a lo largo del proceso electroforético, éstas se clasifican en electroforesis nativas o desnaturalizantes
- En una...
* Que se hizo, como se hizo y cuál fue el propósito de la medición.
* Ventajas y desventajas de los métodos utilizado.
* Conclusiones sobre los métodos y aspectos relevantes.
* Explicar el método electroforesis.
Explicar el método electroforesis:
La electroforesis es un método analítico –semipreparativo, usada para la separación de moléculas según la movilidad deestas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
Fundamentos de la electroforesis
La electroforesis es la migración de solutos iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico; Estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo (electrodos - y +), en dependencia de una 1Master en Ciencias Bioquímicas. Investigadora Agregada. combinación de su carga, peso molecular y estructura tridimensional.
Según la disposición del soporte puede ser horizontal o vertical. Mirar figuras.
Es de destacar que a escala analítica, los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad, poder de resolución y versatilidad, y sirven como método de separación de mezclas complejas deácidos nucleicos, proteínas y otras biomoléculas, donde aportan un potente criterio de pureza. Se pueden conocer también mediante estas técnicas, las características ácido-básicas de las proteínas presentes en un extracto crudo, lo que da la información necesaria si se pretende realizar una separación cromatográfica basada en diferencias de carga. Es útil además para determinar otros parámetros comopeso molecular, punto isoeléctrico y número de cadenas polipeptídicas de las proteínas.
La velocidad de migración (v) de la partícula es directamente proporcional al producto de su carga efectiva (q) y el gradiente de potencial eléctrico (E) e inversamente proporcional al coeficiente de fricción (f) relativo a la talla y forma de la molécula, o sea, a la resistencia que le ofrece el medio.
V= q E / f
La velocidad de migración electroforética depende de la densidad de carga de la molécula (relación carga / peso), del voltaje aplicado y de la porosidad del gel de electroforesis. El voltaje no se puede incrementar indiscriminadamente porque se genera un excesivo calor. En contraste, al aplicar bajo voltaje puede ocurrir una pobre separación, por causa de la difusión por tiempo muyprolongado de la corrida electroforética.
La mayoría de las biomacromoléculas (proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos) poseen determinada carga eléctrica con grupos aniónicos y catiónicos capaces de disociarse. La carga neta de la partícula está dada por el pH del medio y puede ser modificada por la interacción con pequeñas moléculas de iones u otras macromoléculas. De lo anterior se deduceque el pH influye sobre la velocidad de migración de las moléculas.2 En el punto isoeléctrico de la biomolécula, pH al cual su carga neta es 0, esta no migra. Por debajo del punto isoeléctrico tiene carga neta positiva y migra hacia el cátodo, y por encima del punto isoeléctrico tienen carga neta negativa y migra hacia el ánodo.
El soporte sobre el que tiene lugar el desplazamiento de lasespecies es un gel de poliacrilamida, este tipo de análisis se caracteriza porque:
* La migración es proporcional a la carga neta, el tamaño y la forma de la proteína
* Los geles son químicamente inertes, transparentes y estables en un amplio rango de pHs, temperatura y fuerza iónica
* Los geles de poliacrilamida (PAGE) se forman por la polimerización de la acrilamida por acción de unagente entrecruzador, la bis-acrilamida, en presencia de un iniciador (TEMED (N,N,N,N’-tetrametilnediamina) y como catalizador el ión persulfato (S2O8- ), que se añade en forma de persulfato amónico
En función del estado de las proteínas (nativo o desnaturalización) a lo largo del proceso electroforético, éstas se clasifican en electroforesis nativas o desnaturalizantes
- En una...
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