Aplicación De La Técnica De Pcr Para La Identificación Del Género Sporothrixen Muestrasde Suelo”

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
CENTRO DE INVESTIGACIONES EN CIENCIAS MICROBIOLÓGICAS POSGRADO EN MICROBIOLOGÍA

“APLICACIÓN DE LA TÉCNICA DE PCR PARA LA IDENTIFICACIÓN DEL GÉNERO SporothrixEN MUESTRASDE SUELO”

TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE:

MAESTRO (A) EN CIENCIAS (MICROBIOLOGÍA) CON OPCIÓN EN: MICROBIOLOGÍA MÉDICA

PRESENTA: PRESENTA: QFB GRACIELA AVILA FUENTES QFBGRACIELA AVILA FUENTES ASESOR DE TESIS: ASESOR DE TESIS: M. C. ALEJANDRA PAULA ESPINOSA TEXIS ASESOR EXTERNO M. C. ALEJANDRA PAULA ESPINOSA TEXIS D. C. B.M. FRANCISCA HERNÁNDEZ HERNÁNDEZ ASESOR EXTERNO

PUEBLA, PUE. DICIEMBRE, 2011

La ponente fue apoyada con una beca otorgada por el Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT) durante el periodo septiembre 2009-Agosto 2011.AGRADECIMIENTOS A Dios por estar conmigo en cada día de mi vida. A mi Mamá por ser mi mejor amiga, por haber fomentado en mí el deseo de superación y el anhelo de triunfo en la vida y por el apoyo incondicional que me ha mostrado siempre. A mi Papá por su apoyo, ejemplo y confianza. A mis Abuelos por todo el cariño y apoyo que me han brindado siempre. A ti Marielita que aunque estas en el cielo, siempre tesiento conmigo. A mis hermanos por su apoyo y por siempre sacarme una sonrisa. A mis dos amores: A mi hijo que es el principal motor en mi vida, te amo Angelito. A mi esposo por su amor y apoyo durante todos estos años, por entender mis ausencias y mis malos momentos. A la M. en C. Alejandra por su apoyo y el interés que me brindo durante la realización de este trabajo. A la Doctora FranciscaHernández Hernández, por su apoyo, tiempo y conocimientos brindados como asesora. A la Doctora Patricia Manzano por formar parte de mi comité tutoral, así como la revisión de este escrito. A la Doctora Patricia Sánchez por formar parte de mi comité tutoral, así como la revisión de este escrito. A la Doctora Rosy Rocha por formar parte de mi comité tutoral, así como la revisión de este escrito y losconsejos brindados. Al Laboratorio de Micología Medica de la Universidad Nacional Autónoma de México por todas las atenciones prestadas. A mis compañeros del Laboratorio de Micología Medica de la Universidad Autónoma de Puebla por su amistad.

RESUMEN

La Esporotricosis es una micosis subcutánea cuyo agente etiológico es el hongo dimórficoSporothrix, este tiene una amplia incidencia en laRepública Mexicana y se presenta en varios estados incluidos Puebla, este es una de las regiones con óptimas condiciones en ámbito ecológico, socioeconómico y por el tipo de actividades ocupacionales (campesinos, floristas, etc) desarrolladas en las regiones rurales.

En el presente estudio se realizó el procesamiento de 261 muestras de suelo de los municipios de Huauchinango, Atlixco, Teziutlán yZacatlán sin obtener aislamientos positivos en las muestras, por este motivo fueron utilizadas 10 cepas del Laboratorio de Micología Medica del Instituto de Ciencias de la Universidad Autónoma de Puebla pertenecientes a los municipios en estudio. Estas cepas fueron identificadas por su morfología macroscópica y microscópica como Sporothrix mexicana y

Sporothrixschenckiilas cuales se diferenciaronprincipalmente en su fase filamentosa ya que el tamaño de los conidios en la especie mexicana son más grandes ( 4 x 2 μm) que los de S.schenckii (3 x1.5).

Otro objetivo del trabajo fué la extracción de DNA de muestras de suelo con el kit ZR SoilMicrobe DNA (ZymoResearch Corp.) donde también se obtuvieron resultados negativos en las muestras lo cual indica que no hay presencia de este hongo enellas.

Se amplifico el gen de la calmodulina en los10 cultivos mencionados, se secuenció y se identificaron 4 aislados comoS. mexicana y 3 aislados como S. schenckii, lo cual difiere con el trabajo hecho por Marimonquien solo obtuvo S. mexicanade los aislados de Puebla, México; las 3 cepas restantes no pudieron identificarse.

ÍNDICE GENERAL

1. INTRODUCCIÓN 2. MARCO TEORICO 2.1 Agente...