Tecnicas de orientacion para la identificacion de sanbre

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TECNICAS DE ORIENTACIÒN PARA LA IDENTIFICACIÒN DE SANGRE
1.- TÈCNICA DE LA BENCIDINA O DE ADLER
1.1.- FUNDAMENTO QUIMICO:
Las peroxidasaas sanguíneas son catalasas que, como su nombre lo indica, poseen actividad catalítica (enzimática) en las reacciones de oxidación, ya que tienen la propiedad de descomponer el peróxido de hidrógeno u otros peróxidos oránicos, produciendo liberación deradicales oxhidrilo según la siguente rección:

El grupo hem de la hemoglobina posee esa actividad enzimática, que puede catalizar la ruptura del peróxido de hidrógeno. Mientras no estén presentes otras sustancias orgánicas oxidantes, esta actividad de la hemoglobina, descompone el peróxido de hidógeno en agua y oxígeno, que al reaccionar con la bencidina la oxidarán formando un compuestointensamente azul.


La oxidación de la bendicinaes utilizada como prueba presuntiva para la identificación de sangre. La técnica tiene una sensibilidad de 1,300,000 a 500,000.
Un resultado negativo excluye la presencia de sangre; si la reacción es positiva requiere, como toda técnica de orientación del empleo de reacciones de confirmaciñon ya que se pueden tener falsas reacciones positivas con otrassustancias que tengan actividad semejante a las de las peroxidasas o bien con otros materiales oxidantes.

1.2 PREPARACIÓN DEL REACTIVO:
A) SOLUCIÓN DE BENDICINA:
0.25 g. de bencidina se disuelven en 175 ml. De etanol y se añaden 5 a 10 gotas de ácido acétilico glacial. Se guarda en un frasco gotero ámbar, en refrigeración en tanto no se usa.
B) H2 O2 AL 3%; también en un frasco de ámbar.1.3 PROCEDIMIENTO:
Humedecer un hisopo con H2O destilada y frotarlo sobre la mancha problema.
Añadir al hisopo 1 o 2 gotas de solución de bencidina, después de unos momentos de observar que no dé coloración con ésta, poner la misma cantidad de H2O2 sobre el hisopo.
En caso positivo aparecerá rápidamente una coloración azul.

2.1 TÉCNICA DE LA FENOFTALEINA O DE KASTLE- MAYER


a) Lafenolftaleína debe ser reducida previamente a fenolftaleína incolora y este reactivo, por su labilidad, debe se guardado en refrigeración en frascos ámbar.
b) Se trabaja en medio alcalino en vez de en medio ácido.
c) Se efectuarà un calentamiento previo a 100ºc durante un minuto.

TERMOLABILIDAD
Se ha confirmado que todas la peroxidasas vegetales se inactivan por calentamiento a 100ºc. a la mismatemperatura las peroxidasas de origen animal son estables. Un periodo corto de calentamiento (un minuto a 100ºc) servirá para diferenciar una de otra.
TIEMPO
Las peroxidasas de origen animal son muy estables; las manchas de sangre humana dan resultados positivos aún después de varios meses de haberse producido. Cuando manchas de la misma edad pero de origen vegetal son tratadas de esta manera,dan resultado negativo.
Ph
Las peroxidasas de las plantas reaccionan en medio ácido, pero no en medio alcalino. Por esta razón, la técnica de Kastle-Mayer es más confiable. A pesar de esto deben efectuarse pruebas testigo sin añadir agua oxigenada a muestras previamente calentadas a 100ºc.; aún así, sigue siendo una técnica presuntiva.
Esta técnica de la fenolftaleína reducida es más sensibleque la de la bencidina, siendo esta sensibilidad de 1:1,000,000 a 10,000,000.
2.2 PREPARACIÓN DEL REACTIVO
A) solución de fenolftaleína:
Fenolftaleína 2g.
Hidróxido de potasio 20g.
Agua destilada 100ml.
Polvo de zinc 20g.
Disolver estas sustancias y colocarlas a reflujo con el polvo de zinc hasta completa decoloración. Esta solución madre deberá guardarse en un frascoámbar en refrigeración y deberá añadírsele polvo de zinc.
B) Solución de trabajo:
Diluir la solución madre en etanol en la proporción de 1:5; la que también deberá refrigerarse en tanto no se use.
C) Solución de agua oxigenada al 3%
2.3 PROCEDIMIENTO
Humedecer un hisopo con solución salina, frotar la muestra problema y pasarlo a un tubo de ensayo con 2ml de la misma solución, calentar un...
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