Estudios de Purificación y Propiedades Cinéticas de Arginasa de Hígado de Rata

Resumen
Arginasa es una enzima implicada en la última etapa del ciclo de la urea, actuando sobre arginina(Arg) paraformar ornitina y urea como productos( proceso dependiente de Mn+2). Con el fin de determinar las propiedades de dicha enzima, se extrajo la arginasa desde un macerado de hígado de rata,purificándose con sulfato de amonio y métodos de separación cromatográficos, para luego proceder a analizar parámetros de estabilidad de la enzima, tales como co-factores, interferentes, pH óptimo, entreotros. Además de esto, se efectuó el estudio de parámetros cinéticos de la enzima obteniendo valores para Km y Vmax de ….. mM y …….. respectivamente. Aquellos resultados irían acorde a laspropiedades esperadas de la Arginasa de acuerdo al rol regulatorio que cumpliría en el hígado de mamíferos y otras especies de animales.

Introducción

La enzima Arginasa se encuentra solo en losorganismos ureolíticos y desempeña un rol fundamental en la síntesis de urea en el hígado.
La arginasa es una enzima presente en el hígado que participa en el ciclo de la urea y cataliza la degradaciónde la L- arginina en ornitina y urea. La arginina es formada a partir de glutamato en el citoplasma del hepatocito luego de una serie de reacciones enzimaticas1. En el ciclo de la urea, se agregan 2grupos aminos, el primero se realiza en la mitocondria del hepatocito a partir de ornitina, la segunda, se realiza a partir de la arginosuccinato para formar arginina liberando fumarato, luego deesto actúa la Arginasa catalizando la siguiente reacción:

La actividad de la enzima fue determinada midiendo la formación de uno de sus productos, la urea, la cuál reacciona con el α- isonitrosopropiofenona dando un compuesto coloreado , el cuál es determinado mediante absorciometría, en el caso de la concentración de la proteína , se utilizó en método de Bradford.
En el presente, se... [continua]

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