Articulo PPO Astrolabio
6
El gen
de las sombras
Solanum betaceum
Fotografía: Laura Pulido - Área de Comunicaciones, Gimnasio Campestre.
7
ARTÍCULO
oRIGINAL
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE
LA REGIÓN 3’
DE UN GEN QUE CODIFICA UNA POLIFENOL OXIDASA
(PPO) EN TOMATE DE ÁRBOL
(Solanum betaceum (
)
Roberto Carlos Lenis Posada 1 y Mauricio Pulido Jiménez
2
centrobiomol@campestre.edu.coRESUMEN
SUMMARY
ppo
Palabras clave:
Solanum betaceum
Key words:
8
INTRODUCCIÓN
-
Solanum betaceum
-
-
-
-
-
-
-
ppo
9
E. coli
-
-
cación de los DNAs genómicos:
-
Diseño de los iniciadores para PCR: Las
-
ppo,
-
MATERIALES Y MÉTODOS
Material vegetal:
-
Solanum betaceum
Solanum tuberosum
ppo
Cultivo de Escherichia coli
o
mico de tomate de árbol, papa y E. coli
del gen ppo detomate de árbol:
10
gen ppo
Análisis de similitud con genes y proteínas PPO previamente reportadas: La
-
-
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Iniciadores para PCR
genes ppo
-
-
-
aislado:
-
gen ppo
-
11
-
-
en los genes ppo
ppo,
ppo
ppo
pondiente al gen ppo de tomate de árbol
genes ppo
-
Iniciador
InfPPO-F
PPO-Rv
Longitud (pb.)
20
21
Posición degenerada
nucleótidos 4, 7, 9 y 15nucleótido 11
% G-C
36,4
38,0
Tm (oC)
63,5
67,0
Tabla 1.
tomate de árbol.
ppo de
Especie
Gen
Tamaño gen
(pb.)
Lugar posicionamiento
iniciadores
Tamaño producto PCR (pb.)
Tomate
ppo-A
1893
881 - 1762
901
Tomate
ppo-B
1791
884 - 1771
908
Tomate
ppo-C
1881
869 - 1750
901
Tomate
ppo-D
1776
869 - 1756
908
Tomate
ppo-E
1764
878 - 1744
887
Tomate
ppo-F
1758
878 - 1738
881Papa
ppo-POT 32
1794
887 - 1774
908
Papa
ppo-POT 33
1800
893 - 1780
908
Papa
ppo-A
1752
866 - 1732
887
Papa
ppo-B
1767
881 - 1747
887
Tabaco
ppo
1781
886 - 1761
896
Tabla 2. Sitios de posicionamiento de los iniciadores diseñados para este estudio sobre genes ppo de diferentes especies y
tamaño de los productos de PCR que permiten generar.
12
ppo de
tomate de árbol.
--
-
o
o
Reactivo
H2O
Buffer PCR
MgCl2
dNTP’s
Iniciador SupPPO-F
Concentración inicial
5X
25 mM
2.5 mM
DNA (dil 1:10)
Taq Polimerasa
-
Volumen/Reacción
1X
4.5 mM
0.2 mM
-
Tabla 3
genómico de tomate de árbol.
1
2
3
ppo a partir de DNA
4
5
Etapa
Denaturación Inicial
950 pb.
Temperatura /
Tiempo
o
94 C X 4 min.
1000 pb.
Figura 1
correspondientes a genes ppo. Línea 1: blanco; Línea 2:genoma de E. coli
Línea 4: genoma de tomate de árbol; Línea 5: marcador de
peso molecular.
Denaturación
Anillaje
Extensión
94 oC X 1 min.
57 oC X 45 seg.
72 oC X 75 seg.
72 oC X 7 min.
Número
de ciclos
1
45
1
Tabla 4.
por PCR del fragmento de 950 pb. del gen ppo a partir de
DNA genómico de tomate de árbol.
13GCGAGACTTCACCACCATTCTTTGGTACCAGAGTCACCGCAATAGTGTTTTCATCTTCCAGGCCAATGTCCTCCAACAGTTCAGTTATCGCCAGCTGCAAAGTAGCACTCGCAACATGATCAGAATCATTAGCTTGGTGAACATGTGGCAAGCTAGTATAGCTCCCCGCGAACTCTATCATGTCAAGCTCATCCGCTTTCACGTTCTTGTCCACGTTCAGGAACACATCGAACCTTACATATTCTCTATTATCATATTTTATGTAGTTGAATGTTAGTAACTCCTCTTGTTCATTCTTCTCCTGTTGAGTCCTCGAGGAGGCCGGCCTATTGATGGAAAACGAAATGGCTTTGTCCAGCTTAAAGATTGGGAATACCTTGCTCGCTTGCAGAAGTGAACCTGTATTCACTTTCCCATCTGCTTTCTTTTTGTTTGGCTTGAAGTTACACCATGGGGTGGGCATTGGTGCGTAATCGTACCCCATCTTCTTCGTGTCCAAACAGTCTCGTACTTTCACGAGGTAAGGATTTTTGTTTTCATCGTGGAAAAAAAATTTGGAGACCAAACAGTCTTTATGTGAAAGATTCCTTCTTTTCCCTCCGATTTGTTTCAATTCATTCGAGAATAACGCGGGGGCCATAAAAAACCAGCTGCCTCATGACTGACTCTGAGGCGCGAAAAACGTGANGATCCAACGGGATTCCATACCCTGAAACTCCATGCTGTAAACTACGTGTGCTGTATGTTGGGCAACTTAGTTGTTCAATGCCACACCTCCCGCGAGTAACCACACCATCTGTAAAATACAGACGTAACGTTGAAACTCACAGAGCTGACGGGTTGCGTCTACCCTCGTAACAACCTGACACTTTCTTTCCAAGCATGCGCAGATCCTTACAAGGCCTTGTATGCCTATGCCTGTGTCCAACTAGGGCTTTTNC
Figura 2. Secuencia de nucleótidos correspondiente al fragmento del gen ppo
Especie
Tom. Árbol
Tomate
Tomate
Tomate
Tomate
Tomate
Tomate
Papa
Papa
Papa
Papa
Papa
Papa
Tabaco
Batata
Batata
Durazno
Pera
Haba
Manzana
Manzana
Gen
ppo
ppo A
ppo B
ppo C
ppo D
ppo E
ppo F
pot 32
pot 33
pSP32
ppo A
ppo B
pSRP33
ppo
ppo
ppo -1
ppo
ppo
ppo...
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