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Diario de bioenergética y biomembranas, Vol. 30, nº 5, 1998

2+

Avances en la purificación de la Ca mitocondrial
103
Uniporter inhibidor de la etiqueta
RU3601
2
2
2
Cecilia Zazueta, 2,3Gabriela Zafra, Gabriela
Vera, Cesar
Sanchez y Edmundo
Chávez

2

Recibió 19 de junio de 1998

Durante muchos años eluniporter de calcio ha eludido los intentos de purificación, en parte debido a
las dificultades inherentes a la purificación de proteínas hidrofóbicas baja-abundancia (Reed y
Galdakao, 1974). Fase líquida preparativa enfoque isoeléctrico mejoró el fraccionamiento de
proteínas de la membrana mitocondrial. Una sola 6-h ejecutar resultó en un incremento de 90-fold
en la actividad específica defracciones activas agrupadas sobre una fracción de semipurified,
permitiendo para el enriquecimiento de la función de transporte de calcio en las vesículas de la
103
citocromo oxidasa. Una poderosa herramienta adicional en el aislamiento
de como
los uniporter
era el
RU360
un ligando
deuso
afinidad;
del inhibidor
la etiqueta una proteína de 18 kDa se purificó en nondenatured, sino más bien inactivo,siguiendo
este de
procedimiento
2+
formulario. La proteína marcada corresponde a la proteína que demostró actividad
de transporte de Ca.
Palabras clave: Mitocondrias; CA 2+
uniporter; inhibidores de calcio.

INTRODUCCIÓN

Puente rutenio complejo que posee la mayor actividad
inhibitoria de rutenio rojo sí mismo.
Las funciones actualmente propuestas para el
En contraste con los notables avances en elcampo de
transporte de calcio intramitochon-drial (Hansford, 1988;
la regulación metabólica del calcio, intenta identificar los
McCormack y Denton 1989) enfatizan la importancia de2 +
componentes del calcio transporte sys-tem con el objetivo
acumulación
y, de este modo, un renovado interés en la
la
Ca
de aislar a los y reconocimiento institución el proceso, aún
investigación del mecanismo deabsorción. El portador de
queda por hacer. La concentración de baja uniporter,
la absorción es un uniporter que reduce la concentración de
estimado entre 0.001-0.01 nmol/mg de proteína, constituye
calcio extramitochondrial dentro de la concentración de 10- 7
un serio problema para su aislamiento, así como la
5
a los -10
M; la tasa de absorción es una función de la
selección del detergente adecuado paraquitar el uniporter
concentración de calcio mostrando cinética sigmoidea,
K del
de los lípidos envi-ambiente sin desnaturalizar las
0.5 depende
potencial
de membrana y una colina coefi-ciente cerca de 2.0 (Gunter y Pfeiffer,
que
proteínas. Incluso con estas dificultades, sin embargo, ha
1990). Este sistema es inhibida por concentraciones bajas de lantánidos y rutenio
rojo (Reed y Galdakao, 1974).Ying et al (1991), divulgado recientemente, la síntesis de habido
un oxo- alguna suc-cess en aislar, identificar y reconstituir
este portero (Gunter y Pfeiffer, 1990). Saris et al (1993)
encontró que anticuerpos levantados contra un complejo de
la glicoproteína-péptido inhibición el calcio uniporter en
mitoplasts de hígado de rata. Mironova et al (1994) reportó
la purificación del componente deformación de canal de
1
Utilizada abreviaturas: té, trietanolamina; AMIGOS,
ese complejo y describió sus propiedades de canal al ser
(3-[(3-Cho-lamidopropyl) dimetilamonio] - l - propano); DEBE,
reconstituida en una bicapa lipídica planar. Nuestro
1-tetrametil-phenylendiamine; COV, citocromo oxidasa vesículas; SMP,
laboratorio
partículas submitochondrial; 12 C8
E de mono-yV-dode
- reportó laidentificación de una proteína de
peso molecular baja, es decir, 20 kDa, utilizando
cyloctaetilenglycol; CCCP, carbonilo cianuro m-clorofenil hidrazona.
anticuerpos específicos que inhiben el transporte de calcio
2
Departamento de Bioquimica, Instituto Nacional de Cardiología,
en un 60% en hígado de rata mitoplasts (Zazueta et al.,
Ignacio Chávez, México D.F. 01480, México.
1994). En este trabajo...