Biologia molecular

Análisis en Genética

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Análisis Genético
FUNCION BIOLOGICA

Gen o genes implicados

Localización
Cartografiado

Función

Interacciones

TIPOS DE MUTACIÓN

MUTACIÓN GÉNICA
-El alelo de un gen sufre un cambio, convirtiendose en un alelo diferente. -Ocurre en un único gen y mapea en un único locus cromosómico (“punto”) MUTACIÓN PUNTUAL

MUTACIÓN CROMOSÓMICA
ALTERACIONESCROMOSÓMICAS ESTRUCTURALES: -Reorganización de partes de un cromosoma ALTERACIONES CROMOSÓMICAS NUMÉRICAS: -Cambio en el número de cromosomas

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ESTRATEGIAS DE DIAGNÓSTICO GENÉTICO
LA PATOLOGÍA ESTUDIADA: 1) ¿Está asociada a una alteración cromosómica?
SI NO

2) ¿Presentan herencia mendeliana?
NO

Diagnóstico Citogenético 4) ¿Gen identificado?
SI NO

3) ¿Locus localizado? SI
SI NODiagnóstico Indirecto con marcadores

Diagnóstico por patrón de segregación

Estudios de asociación y factores de riesgo

5) ¿Muchos alelos mutados? 5) ¿Un alelo prevalente?

Diagnóstico Indirecto con marcadores Diagnóstico Directo

ESTRATEGIAS DE DIAGNÓSTICO GENÉTICO
LA PATOLOGÍA ESTUDIADA: 1) ¿Está asociada a una alteración cromosómica?
NO

2) ¿Presentan herencia mendeliana?

3)¿Locus localizado? SI 4) ¿Gen identificado?
SI SI

5) ¿Un alelo prevalente?

Diagnóstico Directo

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EL DIAGNÓSTICO DIRECTO
•Máximo nivel de precisión en el diagnóstico: Secuenciación del locus mutado. (inviable su generalización)

•Generalmente el diagnóstico directo de una mutación se realiza mediante el estudio de: Cambios en la estructura primaria del ADN (secuencia) Variaciones detamaño. Pérdida o ganancia de dianas de restricción Variaciones en sus propiedades físico-químicas. Alteración de su movilidad electroforética o sus propiedades de apareamiento Cambios en los productos génicos: ARNm inestables o de tamaño distinto. Proteínas truncadas.

HERRAMIENTAS PARA LA DETECCION DE MUTACIONES

Enzimas de restricción Técnicas de separación electroforética de Ac. NucleicosHibridación de ácidos nucleicos Amplificación enzimática del ADN

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HERRAMIENTAS PARA LA DETECCION DE MUTACIONES

Enzimas de restricción Técnicas de separación electroforética de Ac. Nucleicos Hibridación de ácidos nucleicos Amplificación enzimática del ADN

Enzimas de restricción
- La utilización de ENZIMAS DE RESTRICCIÓN fué el avance clave en la tecnología del DNA recombinante.-También conocidas como endonucleasas, cortan los enlaces fosfodiester a partir de una secuencia que reconocen
-DIANA:(Entre 4 y 8 nucleótidos. PALINDRÓMICAS). ALTA ESPECIFICIDAD

-Toman el nombre de las bacterias que la producen: Taq I, HindIII y EcoRI, EcoRI: E = género Escherichia co = especie coli R = cepa RV 13 I = primera endonucleasa aislada de esta cepa

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Enzimas de restricciónABRUPTOS
- CORTES ABRUPTOS: (EXTREMOS ROMOS)

- CORTES ESCALONADOS: (EXTREMOS PEGAJOSOS).

ESCALONADOS

Algunas MUTACIONES pueden producir la pérdida de una diana o la aparición de una nueva diana donde antes no existía.

HERRAMIENTAS PARA LA DETECCION DE MUTACIONES

Enzimas de restricción Técnicas de separación electroforética de Ac. Nucleicos Hibridación de ácidos nucleicos Amplificaciónenzimática del ADN

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Electroforesis de Ac. Nucleicos
-Método más común y eficaz para separar moléculas de ADN (o ARN) en función de su tamaño. -Matriz semisólida: Gel de Agarosa o Poliacrilamida. -Buffer a pH básico. -Parámetro discriminatorio: poro de la matriz.

HERRAMIENTAS PARA LA DETECCION DE MUTACIONES

Enzimas de restricción Técnicas de separación electroforética de Ac.Nucleicos Hibridación de ácidos nucleicos Amplificación enzimática del ADN

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Hibridación de ácidos nucleicos
- MOLÉCULA DE ADN: Complementariedad de bases - Alta Estabilidad -DESNATURALIZACIÓN: Separación experimental de las dos hélices -Energía en forma de calor. -Rotura de química (formamida) -Disminución de la concentración salina

- RENATURALIZACIÓN: Depende fundamentalmente de la...