Biologia molecular

AGAR MR-Vp
ESPECIFICACIONES
El Medio MR-VP es utilizado para la diferenciación de organismos coliformes en base a las pruebas de Rojo de
metilo y Voges-.Proskauer. Este medio también es conocido como Rojo de Metilo Voges- Proskauer
En 1915 Clark y Lubs demostraron que las bacterias del colon de la familia aerogenes podían dividirse en dos
grupos en base a su acción en un medio con dextrosa ypeptona. Cuando se probaron con el Rojo de Metilo
como indicador de pH, el grupo de coliformes producía una gran cantidad de ácido mientras que el grupo de
los aerogenos producía una reacción menos ácida. La prueba para detectar a los altos productores de ácido
es conocida como Rojo de Metilo (MR). La prueba para detectar a los menos productores de ácido está basada
en el procedimiento quedescribieron Voges y Proskauer en 1898 donde se presenta una reacción colorida
cuando los cultivos se incuban en un medio conteniendo dextrosa y peptona y se les adiciona hidróxido de
potasio exponiéndolos al aire. Esta reacción pone de manifiesto la formación de acetilmetilcarbinol y es
conocida como la prueba de Voges-Proskauer (VP).
En este medio las peptonas proporcionan la fuente de carbonoy nitrógeno. La dextrosa es el carbohidrato
fermentable y el fosfato actúa como buffer.
Mezcla de Peptonas 7.0
Dextrosa 5.0
Fosfato de Potasio 5.0
pH 6.9 ± 0.2
Método:
Suspender 17 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa
disolución y hervir durante un minuto. Dispensar en tubos de vidrio, tapar y esterilizar en autoclave a 118-
121°C (nomas de15 libras de presión) durante 15 minutos.
Procedimiento:
1. Inocular el medio a partir de una colonia aislada.
2. Incubar a 35±2°C durante 48 horas.
3. Para realizar la prueba RM, transferir 2.5 mL del medio a un tubo de 13x100mL y adicionar 5 gotas
del indicador rojo de metilo. Observar la formació de color.
4. Para la prueba VP, transferir 2.5mL del medio a un tubo de 13x100mL,adicionar 6 gotas del reactivo
de alfa-naftol al 5% y 2 gotas del reactivo de KOH al 40%. Agitar y dejar reposar por 10 minutos.
Observar el cambio de color.
Prueba Reacción positiva Reacción negativa
M R Color rojo brillante No hay desarrollo de color
V P Color Rojo El medio no cambia de color
Almacenamiento: 2-30°C.
Caducidad: 4 años en frasco cerrado.
Presentación: Frasco con 450 g
Sobrepara un Litro

http://www.mcd.com.mx/pdfs/caldo_mrvp.pdf

Caldo Lactosado
Es un medio rico en nutrientes,y no contiene inhibidores del crecimiento bacteriano. El extracto de carne y la peptona, son la fuente de carbono y nitrógeno, mientras que la lactosa es el hidrato de carbono. Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y gas, y éste último se demuestra al usar las campanas Durham.Se lo usa también como medio de preenriquecimiento, porque permite recuperar células injuriadas, diluye sustancias tóxicas o inhibitorias y favorece el desarrollo de Salmonella con respecto a otras bacterias
|Fórmula (en gramos por litro) |Instrucciones |
|  Extracto de carne |3.0 |Suspender 13 gpor litro de agua destilada. Mezclar bien|
| | |y distribuir en tubos con campanitas de Durham. |
| | |Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121°C. |
|  Peptona |5.0 | ||  Lactosa |5.0 | |
| pH final: 6.9 ± 0.2 |

Caldo Selenito-Cisteína
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable,...