Biologia Molecular

TRABAJO DE BIOLOGIA MOLECULAR

DE CADA UNA DE LAS SIGUIENTES TECNICAS REALICE:

- CONCEPTO (QUE ES)
- GRAFICO QUE ESQUEMATICE LOS PASOS DE LA TECNICA
- PARA LA TECNICAS BLOT INDIQUE EL TIPO DE SONDA QUE EMPLEARIA
- 3 APLICACIONES DE PREFERENCIA EN EL CAMPO DE LA MEDICINA HUMANA
- VENTAJAS Y DESVENTAJAS
- ANEXE UN ARTICULO CIENTIFICO (ABSTRACT) EN EL QUE SE HAYA EMPLEADO ESTA TECNICAPARA EL ESTUDIO


1. SOUTHERN BLOT
2. NORTHERN BLOT
3. WESTERN BLOT
4. PCR


REALICE EL EQUEMA DE LA CONSTRUCCION DE UNA GENOTECA EN PLASMIDOS Y COMO RASTEARIA UNA DE INTERES CON UNA SONDA


NOTA: LOS GRAFICOS A MANO
























SOUTHERN BLOTTING

CONCEPTO:
La transferencia de ADN desde el gel de agarosa al filtro de nitrocelulosa lleva elnombre de Southern blotting. simplemente, Southern es un método de biología molecular que permite detectar la presencia de una secuencia de ADN en una mezcla compleja de este ácido nucleico. Para ello, emplea la técnica de electroforesis en gel de agarosa con el fin de separar los fragmentos de ADN de acuerdo a su longitud y, después, una transferencia a una membrana en la cual se efectúa lahibridación de la sonda. Su nombre procede del apellido de su inventor, un biólogo inglés llamado Edwin Southern.

Tipo de sonda: sonda radioactiva.
APLICACIONES:
- Medicina legal: La huella dactilar de ADN, también conocida como análisis del perfil de ADN, se basa en el uso de la técnica de transferencia e hibridación de Southern.
- Detección de enfermedad mínima residual-enfermedad diseminada: Lasensibilidad de la RT-PCR es muy alta. Si se realiza una segunda amplificación (nested RT-PCR) y posteriormente un Southern blot se puede llegar a detectar una célula con traslocación entre un millón de células normales.( http://www.conganat.org/icongreso/conferencias/005/aplicaci2.htm)
- Es utilizada como técnica biotegnológica para la seguridad alimentaria y trazabilidad de los alimentos(http://www.gen-es.org/assets_db/publications/documents/pub_86_d.pdf)
- Esta técnica se ha empleado para el diagnóstico y caracterización de diversas inmunodeficiencias, la distrofia muscular de Duchenne, la hipoplasia adrenal congénita, la deficiencia de glicerol-quinasa, la distrofia miotónica severa y en análisis de mutaciones de genes en células B de leucemia linfoblástica crónica, entre otrasenfermedades

Ventajas y desventajas
Articulo
Hipofunción glucocorticoide en la distrofia miotónica
Estudio genetico
Estudio genético. Se practicó en 16 pacientes que dieron su consentimiento.
Se examinó el DNA mediante las técnicas de Southern blot y PCR (polymerase chain reaction). La técnica de Southern blot se utilizó para el análisis de expansiones largas y heterogéneas de CTG. El DNAfue digerido con las enzimas de restricción Eco RI o BgII, seguido de electroforesis en gel de agarosa al 0,8% y transferencia a membranas de nylon (Hybond N). El Southern Blot fue probado con el fragmento 1,8 kbp HindIII/BamHI de prueba pGB2.6 que detecta la expansión de las repeticiones. Posteriormente las muestras fueron lavadas en 0,5 mol/l de NaOH/1,5 mol/l NaCl, en 0,5 Tris (pH 7,0)/1,5 mol/lNaCl. Las amplificaciones de las repeticiones de CTG fueron medidas en el punto de mayor densidad. (http://scielo.isciii.es/pdf/asisna/v30n2/original2.pdf)


NORTHERN BLOT

Northern blot es una técnica de detección de moléculas de ácido ribonucleico (ARN) de una secuencia dada dentro de una mezcla compleja (por ejemplo, un ARN mensajero para un péptido dado en una extracción de ARNtotal).Para ello, se toma la mezcla de ARN y se somete a una electroforesis en gel a fin de separar los fragmentos en base a su tamaño. Tras esto, se transfiere el contenido del gel, ya resuelto, a una membrana cargada positivamente en la cual se efectúa la hibridación de una sonda molecular marcada radiactiva o químicamente.

Aplicaciones:

El northern Blot permite observar un patrón particular...