Biologia molecular

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BiTEMA III OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE LOS MICROORGANISMOS
El microscopio óptico utiliza la luz visible, con una longitud de onda de 0.4 − 0.7 . El microscopio
electrónico usa un haz de electrones con una longitud de onda de 0.05 · 10−4 nm.
MICROSCOPIO ÓPTICO. TIPOS
MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO O CAMPO LUMINOSO
Es el microscopio que hemos utilizado hasta ahora. Es el más básico y simple. Secaracteriza porque el campo
microscópico está intensamente iluminado y los objetos aparecen más oscuros.
Con este microscopio se obtienen imágenes de 100 a 2000 aumentos. No está limitado por el número de
aumentos, sino por su poder de resolución.
Poder de resolución (PR) es la capacidad de distinguir dos puntos adyacentes como distintos y separados.
PR = . ANcon= apertura numérica delcondensador
ANcon + AN obj ANobj= apertura numérica del objetivo de inmersión
PR = 0.55 . = 0.255
0.9 + 1.25
A menor valor del PR, mayor resolución del microscopio.
El objetivo de inmersión es esencial en Microbiología. Es el que más aumentos proporciona (100 x). Con él
obtenemos mayor apertura numérica del objetivo; el poder de resolución es menor, y su resolución es mayor.
MICROSCOPIO DE CAMPOOSCURO
Tiene un sistema de iluminación especial, de forma que los rayos de luz que parten del condensador inciden
oblicuamente sobre la muestra. Sólo los rayos que contactan con un objeto son dispersados y atraviesan el
objetivo, de manera que son los únicos que vamos a observar.
Se emplea para observar bacterias con morfología especial (espiroquetas) o para detectar un penacho de
flagelos enun extremo de la bacteria. Se usa con microorganismos en fresco.
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES
Tiene un sistema de iluminación especial, y un sistema de lentes especiales que permite diferenciar estructuras
que varían ligeramente en su índice de refracción; proporciona mayor contraste a la muestra. Los objetos
aparecen oscuros, rodeados de un halo más claro.
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIASe basa en la existencia de materiales fluorescentes, que son capaces de absorver luz ultravioleta, excitarse, y
emitir luz visible.

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Estos materiales fluorescentes son naturales, derivados del flúor o del cromo. En Microbiología se emplea
para desarrollar un a técnica muy habitual en hospitales; la técnica de inmunofluorescencia. Se usa en el
diagnóstico microbiológico. Se basa en lareacción antígeno−anticuerpo, habiendo fijado la sustancia
fluorescente en el antígeno, de manera que, al fijarse en la bacteria, es visible al microscopio. Además, la
especificidad de la reacción antígeno−anticuerpo nos permite identificar el microorganismo.
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO. TIPOS
Tiene mayor resolución que el microscopio óptico. Al menos 100 veces mayor, y mayor poder de
magnificaciónde las imágenes. Podemos aumentar de 200.000 a 400.000 veces el objeto.
MICROSCOPIO DE BARRIDO
Muestra imágenes superficiales del objeto; estructuras tridimensionales.
MICROSCOPIO DE TRANSMISIÓN
Muestra estructuras internas o la ultraestructura celular.
PREPARACIONES DE MUESTRAS MICROBIOLÓGICAS PARA SU OBSERVACIÓN EN
MICROSCOPÍA ÓPTICA
Podemos distinguir dos tipos diferentes de muestrasbiológicas:
• Preparaciones en fresco o in vivo.
• Preparaciones fijadas y teñidas.
Las preparaciones al fresco son muy fáciles de preparar; se prepara una disolución acuosa donde se introduce
el microorganismo, se pone una gota en un porta, se tapa con un cubre y se observa.
Se emplean para observar la morfología de bacterias, especialmente de espiroquetas. Sirve también para
observar lamovilidad de las bacterias y para observar cambios citológicos; mitosis, esporulación, etc.
También sirve para observar inclusiones (grasas, etc.)
Las preparaciones fijadas y teñidas son las más utilizadas en Microbiología por dos razones:
• La tinción facilita la visualización de la bacteria
• Con varios colorantes clasificamos la bacteria en distintos grupos.
La mayor desventaja es que la...
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