Biologia

LABORATORIO DE BIOLOGIA No. 5
Efectos de los factores físicos sobre la actividad enzimática

OBJETIVOS:
Reconocer el efecto que ciertos factores tienen sobre la velocidad de las reacciones catalizadas enzimáticamente.
INTRODUCCION:
Las enzimas son catalizadoras biológicas que aumentan la velocidad de las reacciones químicas disminuyendo la energía de activación. Generalmente desempeñan sufunción a temperaturas moderadas y valores de pH cercanos al neutro.
La temperatura: la velocidad de las reacciones enzimáticas dependen del número de moléculas reactivas que contienen energía cinética necesaria en cualquier momento específico. Una manera de aumentar esta velocidad es en incrementar la energía en los reactivos, la mejor forma de hacerlo en el laboratorio es con elcalentamiento. En contraste la aplicación de calor en una reacción enzimática conduce a la desactivación por la desnaturalización de la enzima.
pH: para cada enzima existe un pH optimo en la que se crea condiciones favorables para el mantenimiento de la conformación funcionalmente activa de la molécula. Sabiendo que las enzimas son proteínas, cualquier cambio de puede alterar en la superficie proteica,afectando así las propiedades catalíticas de una enzima. A pH alto o bajo se puede producir la desnaturalización de la enzima y en consecuencia su inactivación. Muchas enzimas tienen máxima actividad cerca de la neutralidad en un rango de pH de 6 a 8.
Activadores e Inhibidores: Activadores (cofactores) cambia la forma de la enzima para formar el complejo enzima-sustrato pueden ser iones metálicosde origen orgánico se llaman coenzimas. Los inhibidores enzimáticos son moléculas que se puede unir a una enzima y disminuir su activación.

MATERIALES:
Vasos de precipitación
Mechero
Tubos de ensayo
Pipetas
REACTIVOS:
Catecol oxidasa
Catecol al 1%
Amilasa (saliva diluida)
Almidón
Lugol
Disolución amortiguadora de pH 3, 0.8, 10.0
Na Cl al 10%
CuSO4 al 1%
Agua destiladaPROCEDIMIENTO:

Ejercicio No. 1
Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática

A). Procedimiento:

1. En un vaso de precipitación se llenó 400ml con agua corriente, se le puso a calentar hasta que hirvió
2. Se llenó otro vaso de precipitación de 400ml con agua corriente, se le añadió hielo
3. Se llenó otro vaso de precipitación con 150ml de agua corriente a temperaturaambiente.
4. En 4 tubos de ensayo se rotulo 3a, 3b, 3c y 3d. y se marcó líneas de 1 y 2 cm desde la base.
5. En cada tuvo se llenó hasta la marca de 1cm de catecol oxidasa.
6. Se los coloco así:
Tubo 3a en el vaso de precipitación con hielo
Tubo 3b en el vaso de precipitación con agua a temperatura ambiente.
Tubo 3c en baño maría a 60 grados centígrados
Tubo 3d en el que contenía aguahirviendo.
7. se midió las temperaturas y se registró en la tabla 1.
8. Se dejó los tubos de ensayo en sus respectivas temperaturas.
9. Se los retiro a los tubos y se añadió catecol en cada tubo hasta la marca de 2cm.
10. Se registró la intensidad del color en cada tubo en la tabla 1, se comparó con los estándares. Se regresó los tubos inmediatamente a sus temperaturas.
11. Seregistró la intensidad de color en la tabla 1 a los 5, 10 y 15 minutos después de añadir el catecol.

B). Procedimiento:
1. Se rotulo tres tubos de ensayo (1, 2 y 3)
2. Se vertió en cada tubo 3ml de amilasa.
3. Al tubo 1 se puso a hervir por 3 minutos.
4. Se añadió 5ml de almidón a cada tubo.
5. Se colocó al tubo 1 y 2 en baño maría a 37 grados centígrados durante 10minutos.
6. Al tubo 3 se puso en hielo durante 10 minutos.
7. Se añadió varias gotas de lugol en cada tubo de ensayo.
8. Se anotó los resultados en la tabla 2.
Ejercicio No. 2
Influencia del pH sobre la actividad enzimática
Para cada enzima existe un pH óptimo en el que se cran las condiciones favorables para el mantenimiento de la conformación funcionalmente activa de la molécula. Si...