Biologia


NUTRICIÓN HUMANA Y DIETÉTICA








Práctica 4ª:

ENZIMAS





Marta Sánchez Bernabé
EPD.1

ENZIMAS
1.CURVA DE CALIBRADO DE p-NF.

La primera parte de la prácticaconsiste en la obtención de la curva de calibrado del p‑nitrofenol (pNF), que se utilizará en el apartado 3 para calcular la [pNF] a partir de las absorbancias obtenidas. En la práctica número 4 no hemosrealizado nosotras la curva de calibrado ya que sabemos realizarla por la practica numero 2 y hacerla nos llevaría mucho tiempo. Si calculásemos las absorbancias de cada tubo y sus siguientesoperaciones, obtendríamos la siguiente recta:

y= 0,0159x + 0,0106
R= 0,9997

2.EFECTO DEL PH SOBRE LA ACTIVIDAD CATALÍTICA

Realizamos el efecto de la actividad enzimática en diferentes pH. El tubo1 se encuentra a pH 2.5, el tubo 2 a pH 7.0 y el tubo 3 a pH 10.0. Los resultados son los siguientes:


tubo

Tampón

agua
p-NFP
10 mM
(sustrato)
Enzima
Abs. 405nm
[p-NF](producto)
[p-NF]
V = --------------
t
0
1,5 ml
1,5 ml





1
1,5 ml
1,3 ml
0,10 ml
0,10 ml
0.680
0.2105
0.0421
2
1,5 ml
1,3 ml
0,10 ml
0,10 ml
0,715
0,2215
0,0443
3
1,5 ml1,3 ml
0,10 ml
0,10 ml
0,901
0,28
0,056

GRÁFICA DE PH


Una vez realizada la gráfica podemos observar que el valor más grande que se alcanza es cuando el pH es 10, por lo que podemos decirque el pH de la enzima será óptimo alrededor de un pH 10, ya que no es un método exacto.

3.EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Para realizar el estudio sobre la temperaturaen la actividad enzimática, realizamos el siguiente proceso sometiendo el tubo 1 a 5ºC, el tubo 2 a 37ºC y el tubo 3 a 75ºC. Los resultados son los siguientes:


tubo

tampón

agua
p-NFP
10mM
(sustrato)
Enzima
Abs. 405nm
[p-NF]
(producto)
[p-NF]
V = --------------
t
0
1,5 ml
1,5 ml





1
1,5 ml
1,3 ml
0,10 ml
0,10 ml
0,785
0.243
0.0162
2
1,5 ml...