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1. PROTOCOLO PARA MICROBIOLOGÍA

1.1. MATERIALES Y EQUIPOS A USARSE

1.1.1. EQUIPOS

- Autoclave
- Balanza
- Incubadora.

1.1.2. MATERIALES.

- 2 Mecheros
- 10 Agitadores de vidrio
- 1 Matraz de 500 mL
- 4 Espátulas
- 3 probeta de 250 mL
- 150 cajas de Petri estériles
- 1 Masking tape
- 2 Papel aluminio
- 3 Marcador permanente punta fina
- 2 Papel toalla
- 5 Pizetas- 100 Microtubos de 1.5 ml
- 3 Gradillas para tubos de 1.5 ml
- 3 Micropipetas automáticas

1.1.3. MEDIOS DE CULTIVO.

-Agar TCBS.
-Agar Marino
-Agar Cetrimide
-Agua destilada
-Cloruro de sodio


1.1.3.1. AGAR TCBS

El Agar TCBS, por las iniciales de Tiosulfato-Citrato-Bilis-Sacarosa es utilizado como medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrios..

El Agar TCBS esaltamente selectivo para las especies de Vibrio debido a sus componentes nutricionales y a la alta concentración de sales y es ampliamente utilizado en placa para el primoaislamiento. Este medio junto en el Agua Peptonada
Alcalina es utilizado para el aislamiento de V.cholerae y otras especies a partir de muestras fecales.

En este medio el extracto de levadura y las peptonas proporcionan lafuente de nitrógeno, vitaminas y aminoácidos. El citrato de sodio, el tiosulfato de sodio y la bilis actúan como agentes inhibidores de microorganismos Gram positivos y
coliformes dando alcalinidad al medio. La sacarosa es el carbohidrato fermentable. El cloruro de sodio promueve el crecimiento. El tiosulfato de sodio es la fuente de sulfuro y el citrato de hierro es un indicador para detectar laproducción deH2S. El azul de timol y de bromotimol actúa como indicadores de pH. El agar bacteriológico es agregado como agente solidificante.


Fórmula (en gramos por litro)
Instrucciones
Extracto de levadura
5.0
Suspender 89 g del polvo en un litro de agua destilada. Calentar hasta ebullición y hervir de 1 a 2 minutos. NO AUTOCLAVAR. Distribuir en placas de Petri estériles.
Peptona de carne5.0

Tripteína
5.0

Citrato de sodio
10.0

Tiosulfato de sodio
10.0

Bilis de buey
8.0

Sacarosa
20.0

Cloruro de sodio
10.0

Citrato férrico
1.0

Azul de bromotimol
0.04

Azul de timol
0.04

Agar
15.0

pH final: 8.6 ± 0.2


1.1.3.2. AGAR MARINO
Es un medio para enumeración de bacterias totales en ambiente marino.
Fórmulas
Cloruro de sodio 19,4
Cloruro demagnesio 8,8
Peptona bacteriológica 5
Sulfato de sodio 3,24
Calcium Chloride 1.8
Extracto de levadura 1
Cloruro de Potasio 0,55
Bicarbonato de Sodio 0,16
Citrato férrico 0,1
Bromuro de potasio 0,08
Cloruro de Estroncio 0,034
Ácido bórico 0,022
Fosfato disódico 0,008
Silicato de sodio 0,004
El fluoruro de sodio 0,0024
Nitrato de amonio 0.0016
Agar Bacteriológico 15

1.1.3.3. AGARCETRIMIDE

Es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de Pseudomonas aeruginosa constituido por:
Digerido pancreático de gelatina 20,0 g
Cloruro de magnesio 1,4 g
Sulfato de potasio 10, g
Agar 13,6 g
Bromuro de N-cetil N,N,N- Trimetil amonio (cetrimide) 0,3 g
Glicerina 10,0 mL
Agua destilada 1.000 mL
pH final 7,2 ± 0,2


1.2. PREPARACIÓN DE PLACAS DE CULTIVO EN AGAR SOLIDO.1.2.1. AGAR TCBS.

Suspender 86 g del medio en un litro de agua destilada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y vaciar en placas Petri estériles. No esterilizar en autoclave.

1.2.2. AGAR MARINO
Suspender 55.2 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y se disuelven por calentamientocon agitación frecuente. Hervir durante un minuto o hasta disolución completa. Esterilizar en autoclave a 121 º C durante 15 minutos.
1.2.3. AGAR CETRIMIDE

Suspender los ingredientes en el agua destilada según especificaciones del proveedor, añadir 10 mL de glicerina y calentar agitando frecuentemente y dejar hervir hasta disolver completamente. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lb de...