Bioquimica

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REPORTE
Introducción (una cuartilla 1.0 p)
Material y reactivos (0.25 p)
Objetivos (0.25 p)
Metodología (1.0 p) Se reportará en pasado
Resultados (1.0 p) tablas, gráficas etc.
Discusión de resultados (2.0 p)
Cuestionario (2.0 p)
Conclusión (2.0 p)
Bibliografía (0.5 p) Obligatorio que sean de libros y artículos consultados, mínimo 2.

Práctica 1
Curvas Estándar y Concentración
Unacurva estándar o curva patrón es una curva de referencia construida por cantidades conocidas de una determinada sustancia (ej. mg) que se utiliza para determinar la cantidad de esa misma sustancia presente en una alícuota. Tiene dos aplicaciones:
* Conocer la confiabilidad de nuestras mediciones
* Utilizarla como referencia para interpolar valores de nuevas determinaciones
Objetivos:* Aprender a realizar y utilizar curvas estándar para determinar concentraciones específicas de soluciones desconocidas
* Conocer y utilizar las diferentes formas de calcular concentraciones
Materiales:
* Micropipeta de 1 ml o jeringa de insulina
* Espectrofotómetro
* 20 Tubos de ensayo
* 2 Pipetas de 5 ml
* 3 tubos de centrífuga
* Gradilla
Reactivos (por grupo):* 100ml de solución de albúmina sérica bobina 10 mg/ml
* 40ml de solución A (proteína de concentración desconocida)
* 20ml de solución B (proteína de concentración desconocida)
* 500 ml de Reactivo Biuret (0.75g Sulfato de cobre, 3g tartrato de sodio y potasio, 125ml de NaOH 10N) guardar en frasco ámbar
* 125ml NaOH
* 500ml NaCl
* Método:
Parte 1. Curva Estándar deAgua
* Sabiendo que la densidad del agua en estado líquido es de aprox. 1kg/litro (puede variar hasta 0.05kg/L por las variaciones de temperatura y presión), podemos predecir el peso del agua si conocemos el volumen.
* Utilizar la balanza analítica, micropipetas o pipetas y agua destilada para realizar una de las siguientes curvas estándar (realizar la correspondiente a su número de equipoOpción 2 |
µl de H2O: | Peso (g): |
0 | |
10 | .0274 |
15 | .0347 |
20 | .0359 |
30 | .0303 |
45 | .0639 |
60 | .0520 |
85 | .0805 |

X | Y |
0 | |
10 | .0274 |
15 | .0347 |
20 | .0359 |
30 | .0303 |
45 | .0639 |
60 | .0520 |
85 | .0805 |

* Graficar la curva estándar y obtener la ecuación de la recta y la pendiente.

Ilustración [ 1 ]. Curvaestándar de agua

* Discutir si los resultados obtenidos concuerdan con los esperados, de lo contrario tratar de explicar a qué se deben las diferencias.
Pequeña variación respecto a los resultados esperados teóricamente que se deben muy probablemente a un manejo poco confiable de los instrumentos y a imperfectos de los mismos.
Parte 2. Curva de Proteína por el método de Biuret
* Realizarla siguiente serie de tubos por duplicado.
* Para la curva estándar (tubos 1 al 6) se utiliza una solución de 10 mg/ml de albúmina sérica bobina (BSA). Para los tubos problema (7 al 10) se utilizan las soluciones de concentración desconocida (A y B).

(ml)Tubo | Solución patrón de albúmina (10mg/ml) | NaCl 1% | Sol. Problema A | Sol. Problema B | ReactivoBiuret |
1 | 0 | 6 | - | - | 4 |2 | 0.25 | 5.75 | - | - | 4 |
3 | 0.5 | 5.50 | - | - | 4 |
4 | 0.75 | 5.25 | - | - | 4 |
5 | 1 | 5 | - | - | 4 |
6 | 1.25 | 4.75 | - | - | 4 |
7 | - | - | 1 | - | 4 |
8 | - | - | 2 | - | 4 |
9 | - | - | - | 0.5 | 4 |
10 | - | - | - | 1 | 4 |

* Mezclar cada tubo por agitación.
* Incubar 30 minutos a temperatura ambiente.
* Leer la A540 utilizando el tubo 1 comoblanco y anotar los datos.
* Calcular los mg de albúmina que corresponden a las cantidades utilizadas en la curva estándar.
* Realizar la curva estándar (mg de albúmina en el eje X y A540 en el Y) y obtener la ecuación de la recta.

Ilustración [ 2 ]. Curva estándar de proteína
| X | Y |
1 | | |
2 | 2.5 | .0995 |
3 | 5 | .149 |
4 | 7.5 | .2045 |
5 | 10 | .256 |
6 | 12.5...
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