Biólogo

Control Microbiológico

Hidrólisis ácida o alcalina como medio de despirogenización:
REFERENCIAS
1. Amano K, Fukushi K. Electron microscopic studies of endotoxinas treated with alkaline and acid reagents. Microbiol Immunol 1984; (2): 161-167. 2. Niwa M, Milner KC, Ribi E, Rudbach JA, Alteration of physical, chemical and biological properties of endotoxin by treatmen with mield alkali.Journal of Bacteriology 1969; 97(3): 1069-1077. 3. Zhang YM, Dai XJ, Zheng CC, Li SS, Zhang XF. Effect of pH value on bacterial endotoxin test. Chinese Pharmaceutical Journal 2007: 42(8): 621-623. 4. Shands, JW., Jr. 1971. Evidence for bilayer structure in gram-negative lipopolysaccharide: relationship to toxicity. Infect, Immun. 4: 167-172 5. Goodman, G.W., and Sultzen, B.M. 1977 Mild alkalinehidrolysis of lipopolysaccharide endotoxina enhances its mitogenicity for murine B cells. Infect, Immun. 17: 205-214 6. Depyrogenation, Parenteral. Drug association, Technical Report No 7 (1985) 7. Tripodi, D., and Nowotny, A. 1996. Relation of structure to function in bacterial O-antigens. V. Nature of active sites in endotoxic lipopolysaccharides of Serratia Marcescen. Ann. N.Y. Acad. Sci. 133:604-621 8. Haskins, W.T. 1961 Spectrophotometric determination of fatty acida mides in lipids. Anal. Chem. 33: 1445-1446. 9. Ribi, E., Amano, K., Cantrell, J.L., Schwartzman, S., Parker, R., and Takayama, K. 1982. Preparation and antitumor activity of nintoxic lipid A. Cancer Immunol. Immunother. 12: 91-96

1. INTRODUCCIÓN Las endotoxinas son los pirógenos más significativos en la industriafarmacéutica y médica. Los métodos de despirogenización han de estar basados en el tamaño, el peso molecular y el centro hidrofóbico del lípido A. Endotoxinas .

1.1 Endotoxinas:

Las endotoxinas son complejos de alto peso molecular asociados a las membranas externas de las bacterias Gram negativas y repartidas uniformemente por estas (Figura 1) El término endotoxina puede referirse a dos tipos demolécula: Endotoxina purificada: procesada in Vitro para estudios y ensayos de laboratorio. Contienen únicamente lipopolisacáridos. Endotoxina no purificada: La encontramos in vivo. Contiene lípidos, carbohidratos y proteínas. Como en los tests de pirógenos de producción farmacéutica encontramos la forma no purificada, a partir de ahora, el término endotoxina se referirá al conjunto anteriormentedescrito. Figura 1. Esquema de membrana de bacterias Gram-negativas Las endotoxinas tiene tres regiones diferenciadas: el Lípido-A (Region III) unido a un polisacárido central o Core (Region II) que a su vez esta unido a una proyecciones largas llamadas antígeno-O ( Region I). (Figura 2)

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Figura 2. Ejemplo de la estructura de una endotoxina y cadena delipopolisacáridos.

1.2 Actividad Biológica: Es del todo conocido que las endotoxinas causan fiebre. En los últimos años, se ha demostrado que estas tienen efectos en un amplio espectro de actividades biológicas entre las que se encuentra el efecto pirogénico. Investigaciones recientes han demostrado que la porción responsable de la actividad biológica de las endotoxinas es el lípido A. Se conocen más de 30actividades biológicas inducidas por el lipido A. Los efectos producidos por esta molécula dependen de la dosis y teniendo efectos en los sistemas de coagulación, alteraciones del metabolismo de los carbohidratos/lípidos, modificaciones en el funcionamiento del sistema de complemento etc. 1.3 Composición química: El lipopolisacárido (LPS) consta de varias partes, lípido A, el núcleo (tambiénllamada Core) y el antígeno O. El lípido A está formado por un disacárido compuesto por dos unidades de Nacetilglucosamina unidas por enlace ß a los carbonos 1 y 6, al que se le unen ácidos grasos mediante enlace éster. Los ácidos grasos (FA) que se encuentran asociados comúnmente en el lípido A son el ácido caproico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico y ácido esteárico. (Figura 3) A...