Bradford
Páginas: 4 (858 palabras)
Publicado: 23 de noviembre de 2012
INFORME 3
CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS: BRADFORD
MARCO TEÓRICO
Un método rápido y preciso para la estimación de la concentración de proteína es esencial en muchos campos de estudio deproteínas. Un método originalmente descrito por Bradford (1) se ha convertido en el método preferido para la cuantificación de proteínas en muchos laboratorios.
El método de Bradford se basa en la unión delcolorante azul de Coomassie G250 a la proteína.
Estudios detallados indican que el colorante libre puede existir en cuatro formas iónicas diferentes para los cuales los valores de pK son 1,15, 1,82 y12,4 (2). Las formas del colorante más catiónicas son rojo y verde, tienen absorbancias máximas de 470 y 650 nm, respectivamente. En contraste, la forma más aniónica del colorante es la azul, el cualse une a la proteína, tiene un máximo de absorbancia de 590 nm. Por lo tanto, la cantidad de proteína puede ser estimada mediante la determinación de la cantidad de colorante en la forma azul iónica.Esto se logra normalmente mediante la medición de la absorbancia de la solución a 595 nm.
El colorante parece unirse más fácilmente a los residuos de arginina y lisina de las proteínas (pero no seune a los aminoácidos libres) (3, 4). Esta especificidad puede conducir a una variación en la respuesta del método para diferentes proteínas, lo cual es el principal inconveniente del método.
Elmétodo de Bradford original muestra grandes variaciones en la respuesta entre diferentes proteínas y se han desarrollado varias modificaciones en el método para superar este problema. Sin embargo, estoscambios generalmente dan lugar a un método de menor robustez, esto lo hace más susceptible a interferencias por otros productos químicos.
Por consiguiente, el método original ideado por Bradfordsigue siendo el más conveniente y ampliamente utilizado.
La determinación del contenido proteico de una muestra requiere la comparación del valor de absorbancia de la muestra con los obtenidos...
CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS: BRADFORD
MARCO TEÓRICO
Un método rápido y preciso para la estimación de la concentración de proteína es esencial en muchos campos de estudio deproteínas. Un método originalmente descrito por Bradford (1) se ha convertido en el método preferido para la cuantificación de proteínas en muchos laboratorios.
El método de Bradford se basa en la unión delcolorante azul de Coomassie G250 a la proteína.
Estudios detallados indican que el colorante libre puede existir en cuatro formas iónicas diferentes para los cuales los valores de pK son 1,15, 1,82 y12,4 (2). Las formas del colorante más catiónicas son rojo y verde, tienen absorbancias máximas de 470 y 650 nm, respectivamente. En contraste, la forma más aniónica del colorante es la azul, el cualse une a la proteína, tiene un máximo de absorbancia de 590 nm. Por lo tanto, la cantidad de proteína puede ser estimada mediante la determinación de la cantidad de colorante en la forma azul iónica.Esto se logra normalmente mediante la medición de la absorbancia de la solución a 595 nm.
El colorante parece unirse más fácilmente a los residuos de arginina y lisina de las proteínas (pero no seune a los aminoácidos libres) (3, 4). Esta especificidad puede conducir a una variación en la respuesta del método para diferentes proteínas, lo cual es el principal inconveniente del método.
Elmétodo de Bradford original muestra grandes variaciones en la respuesta entre diferentes proteínas y se han desarrollado varias modificaciones en el método para superar este problema. Sin embargo, estoscambios generalmente dan lugar a un método de menor robustez, esto lo hace más susceptible a interferencias por otros productos químicos.
Por consiguiente, el método original ideado por Bradfordsigue siendo el más conveniente y ampliamente utilizado.
La determinación del contenido proteico de una muestra requiere la comparación del valor de absorbancia de la muestra con los obtenidos...
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