CIENCIA

Ensayo de Absorbancia (280 nm)
LEY DE LAMBERT-BEERl
La ley explica que hay una relación exponencial entre la transmisión de luz a través de una sustancia y la concentración de la sustancia, asícomo también entre la transmisión y la longitud del cuerpo que la luz atraviesa. Si conocemos Io e Is, la concentración de la sustancia puede ser deducida a partir de la cantidad de luz transmitida.Un rayo de energía radiante con una intensidad inicial Io que se hace pasar a través de una celda de vidrio cuadrada contiendo una solución homogénea de una sustancia que absorbe luz de cierta longitudde onda. La intensidad de la energía radiante transmitida de los reactivos fue menor a la intensidad inicial, debido precisamente a que la solución fue capaz de absorber cierta cantidad de energíaradiante.
La absorción de luz depende de la estructura química del compuesto absorbente, y en especial de ciertos grupos funcionales, de modo que es posible identificar un compuesto por medio de lascaracterísticas de su espectro de absorción.
Las proteínas muestran un fuerte grado de absorción a 280nm en UV, principalmente por los residuos de triptófano y la tirosina, ya que lasconcentraciones de estos aminoácidos en las proteínas es francamente constante. Se puede utilizar la absorbancia a 280nm para estimar la concentración de proteínas
Las proteínas en solución absorben la luzultravioleta con absorbancia máxima a 280nm. Los aminoácidos con anillos aromáticos son la razón principal para el máximo de absorbancia y los enlaces peptídicos son los principales responsables de lacima. La estructura secundaria, terciaria y cuaternaria afectan a la absorbancia, por lo tanto, factores como el pH o la fuerza iónica pueden alterar el espectro de absorción.
Todas las proteínasabsorben fuertemente debajo de 230 nm. La albúmina sérica bovina absorbe 5.0 y 11.7 a 225 y 215. La absorbancia por debajo de 230 nm es debido al enlace peptídico. (SE SUPONE QUE TENDRIAMOS QUE COLOCAR LOS...