cinética enzimatica

-756285-323215
INSTITUTO TECNOLOGICO DE LA PAZ
Reporte de laboratorio
Practica N° 1: Cinética Enzimática
Alumnos:
VARGAS COSIO ANDREA ESTEBANI, VALDEZ ARCE BISMARK ALAN, ORANTES DIEGO.
Miércoles 22 de octubre de 2014
El estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas es debido a la cinética enzimática ya que proporcionan información directa acerca del mecanismo de lareacción catalítica y de la especificad del enzima. A medida que una reacción se realiza siempre en las condiciones óptimas de pH, temperatura y se utilizan concentraciones saturadas de sustrato para una mayor eficiencia en su funcionamiento. Por ello elaboraremos 3 distintos experimentos para conocer su comportamiento óptimo.
Introducción:
La cinética enzimática es el campo de la bioquímica quese encarga de la medición cuantitativa de los índices de reacciones catalizadas por enzimas. Este es el método más antiguo para conocer el mecanismo enzimático y uno de los que continúan siendo más importantes en la actualidad. Una comprensión de la cinética enzimática es importante para entender de qué modo los estados fisiológicos, toxinas y agentes farmacológicos afectan ese equilibrio. Elanálisis cinético puede revelar el número y orden de los pasos individuales mediante los cuales las enzimas transforman sustratos en productos. En este caso la enzima con la que se trabajara ser a la amilasa la cual es una enzima perteneciente al grupo de las hidrolasas, esta actúa sobre los almidones y el glucógeno, rompiendo los enlaces α-1,4, de tal forma que se separan en dos de los fragmentos dela molécula polimérica. Las moléculas que resultan son del disacárido maltosa. Pero la acción de la amilasa salival es de corta duración, el pH óptimo de la amilasa es cercano a 7 y su temperatura óptima es de 60 a 70°C.
Existen muchos factores que afectan la actividad enzimática, unos de ellos son la temperatura, al aumentar la temperatura incrementa la energía cinética de las moléculas. Elnúmero total de moléculas cuya energía cinética excede la barrera de energía Eact para la formación de productos aumenta desde temperaturas bajas, pasando por intermedias hasta altas. El aumento de la energía cinética de las moléculas también aumenta su rapidez de movimiento y también la frecuencia con la cual chocan, esto aumenta el índice de reacción. El pH, Las enzimas tienen un pH optimo o unintervalo de pH en el que su actividad es máxima; a valores superiores o inferiores de pH la actividad disminuye. Esto es porque algunas cadenas laterales de aminoácidos pueden actuar como ácidos o bases débiles que desarrollan funciones criticas en el sitio activo de la enzima. Por otra parte las cadenas laterales ionizadas de la proteína pueden jugar un papel esencial en las interacciones quemantiene la estructura de la proteína. La concentración de la enzima. La actividad de una enzima es directamente proporcional a su concentración, mientras mayor sea la concentración de la enzima, la catálisis del sustrato será más rápida debido a que el complejo ES se encontrara en menor proporción y la [E] sin reaccionar será en mayor cantidad que la [S].
Materiales:
Material:Tubos ensaye 13x100mm/tapa (8)
Gradilla (1)
Marcador
Pipeta de 1, 2,3 y 10 mL(1)
Tips 200 y 1000mL
Placa horadara de vidrio (1)
Gotero de vidrio (4)
PicetaCronometro (1)
Termómetro (1)
Papel pH
Tubos de ensaye 20x250mm con/tapa (7)
Reactivos:
Almidón al 1%
Amilasa 1mg/mLLugol
HCL 0.2%
NaOH 02%
Equipo:
Micropipeta de100,200,1000mLVortexCongelador
Baño maría a 37° y 85°
Metodología:
Concentración de la Enzima: Para estudiar la influencia de la concentración de la enzima sobre la velocidad de reacción y a la vez estandarizar la amilasa para usarla en el inciso B) del experimento se hará uso de la prueba del yodo.
1-Rotular 4 tubos de ensaye con los números 1-4 respectivamente.
2-Agregue a cada uno lo que se indica en el...