Cinetica de microorganismos

CONTEO DE CÉLULAS AL MICROSCOPIO

Cámara de recuento de Neubauer
Que es una cámara de conteo celular? La cámara de conteo es un aparato de vidrio óptico especial de precisión. Se utiliza para contar células u otras partículas en suspensiones bajo el microscopio. Las cámaras de conteo se utilizan principalmente para el análisis de sangre (conteo de leucocitos, eritrocitos, trombocitos). Perolas cámaras de conteo sirven también para el conteo de bacterias y esporas del moho. Principio de construcción: Todas las cámaras de conteo muestran el mismo principio de construcción.

En una placa base rectangular y gruesa de vidrio óptico especial, del tamaño de un porta-objetos, en el tercio medio se hallan cuatro ranuras longitudinales, que transcurren en paralelo con respecto a los lateralescortos. Las dos superficies laterales más grandes están sin trabajar y sirven para la rotulación. El puente central y los dos puentes exteriores están rectificados planos y pulidos. La superficie del puente central es más profunda que los dos puentes exteriores. En el puente central (fondo de la cámara) están grabadas las redes de conteo. Cuando se coloca un cubreobjeto sobre los puentesexteriores, entre la cara inferior del cubreobjeto y el puente central de la cámara de conteo se produce una ranura capilar. La profundidad de la cámara es de 0,100 mm. La división de red de esta cámara muestra 4 cuadrados grandes de una superficie de 1 mm2, respectivamente. Los 4 cuadrados rectangulares se utilizan para el conteo en de los leucocitos en 10X. El gran cuadrado en el centro estáadicionalmente dividido en 5 cuadrados en grupos de 5 con una longitud lateral de 0,2 mm, respectivamente, y un contenido de superficie de 0,04 mm2. A su vez, los cuadrados de los grupos están subdivididos en 16 cuadrados pequeños de 0,0025 mm2 cada uno. Cinco de estos cuadrados de grupos son utilizados en el conteo de eritrocitos en 40X

Descripción de la Cámara de Neubauer

Llenado de una cámara derecuento: Desplazamiento del cubreobjeto: Limpie la cámara y la laminilla de cuarzo suavemente con alcohol. Revise la laminilla de cuarzo que no este desbordada o quebrada. Los puentes exteriores se humedecen con agua destilada y luego se coloca el cubreobjeto a suave presión desde delante sobre la cámara de conteo.

Instalación del cubreobjeto

Llenado de la cámara

Alimentación: Este paso esmuy importante y definitivo en la distribución de las células. El llenado debe ser continuo y en un solo intento. Si se cuenta con una micropipeta se puede llenar con 12 microl por cada una de las areas de la cámara. Llenar la micropipeta con el caldo diluido de células bien mezclado y se sitúa en el punto entre el cubreobjeto y la cámara de conteo. Por capilaridad se llena la hendedura entre elcubreobjeto y el fondo de la cámara. Si son visibles burbujas de aire, si la cámara queda seca lo cual se detecta porque en las esquinas del recuadro de llenado se ven porciones secas o si si el líquido se hincha sobre los bordes en las ranuras quedando inundada, deberá limpiarse la cámara y alimentarse de nuevo.

Recuento de las partículas: Al llevar la cámara al microscopio y al enfocar elcuadro de conteo con el ocular de 4X. Se observa lo siguiente:

Si se van a contar células grandes como son los Glóbulos rojos, ubicarse en cualquiera de las cuadriculas de las esquinas, el conteo en este campo se conoce como BP (bajo poder) Pasar al ocular de 10X para realizar el conteo. Verá lo siguiente:

Si las células que va a contar son pequeñas como son las levaduras, bacterias, etc.,ubicarse en la cuadricula central y pasar al ocular de 10X. Se visualizará de la siguiente manera:

En esta cuadricula se visualizan 25 cuadros, de los cuales se cuentan las células presentes en 5 campos, generalmente se cuentan los cuadros de las esquinas y el central, lo que garantiza un conteo aleatorio. Para realizar el conteo se pasa al ocular de 40X, donde se visualiza cada uno de los campos...