Cinetica Enzimatica

cinetiCINÉTICA ENZIMÁTICA DE LA CATECOLASA

C. Mejia (0910307), J. E. Ortiz (0636308)
Jheortiz@yahoo.es; claudita8809@hotmail.com

UNIVERSIDAD DEL VALLE; DEPARTAMENTO DE QUÍMICA;
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
2011
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Abstract: Se estudió la cinética enzimática de una muestra catecolasa, extraída de la papa,frente a un sustrato conocido como catecol, cuyas reacciones se llevaron a cabo a diferentes condiciones de pH, temperatura y concentraciones de sustrato, enzima y inhibidores como el ácido ascórbico y el EDTA; a través de un método colorimétrico a 420 nm, obteniendo con dichos datos la actividad máxima de la enzima a un pH 5,5……………………………..
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Keywords: actividad catecolasa, catecol, ácido ascórbico, EDTA, inhibición, pH, Temperatura.

1. INTRODUCCIÓN

Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan  reacciones químicas,siempre que sea termodinámicamente posible (si bien pueden hacer que el proceso sea más termodinámicamente favorable).   En estas reacciones, las enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en moléculas diferentes denominadas productos. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimáticas. Debido a que lasenzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su velocidad crece sólo con algunas reacciones, el conjunto de enzimas sintetizadas en una célula determina el tipo de metabolismo que tendrá cada célula. A su vez, esta síntesis depende de la regulación de la expresión genética.[2]

La catecolasa conocida como tirosinasa son polifeniloxidasas (PPO) y corresponden a la clasificación deoxidorreductasas, de acuerdo al tipo de reacción catalizada son los que transfieren electrones, iones o átomos de hidrógeno. Debido a que la tirosinasa presenta el cofactor Cu2+ en su centro activo, se las puede relacionar también con las enzimas del tipo citocromo oxidasas. La PPO es capaz de catalizar reacciones de oxidación de compuestos polifenólicos en presencia de oxigeno molecular y la presenciade los compuestos oxidados por la enzima son precursores de las reacciones de pardeamiento que ocurren en los procesos de pos-recolección y manipulación de frutas y hortalizas; Las reacciones de pardeamiento enzimático en los vegetales, se cree que desempeñan importantes funciones fisiológicas en la prevención al ataque de insectos microorganismos o como respuesta a las heridas ocasionadas en lostejidos vegetales como magulladuras.[3]

La cinética enzimática es la parte de la enzimología que se ocupa del estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas y las causas de su variación. Un ensayo enzimático se basa en la actuación de la enzima sobre una sustancia, llamada sustrato, catalizando su conversión en otra específica, conocida como producto. Normalmente algúnelemento de los que intervienen en la reacción absorbe luz a una longitud de onda determinada, con lo que la reacción puede seguirse por colorimetría o espectrofotometría.

En el presente informe se analizará la influencia de factores como la temperatura, la concentración del sustrato, la concentración de la enzima, el efecto del EDTA y el ácido ascórbico y el pH sobre la acción de la enzimacatecolasa, la cual es una haloenzima que se encuentra en la papa, utilizando para ello un método espectrofotométrico, en el que se desarrolla una coloración amarillosa que es leída a una longitud de onda de 420 nm.

2. MÉTODO EXPERIMENTAL

Se macero 25g de papa, el extracto obtenido se filtró y se diluyo a 50 mL con buffer fosfato 50mM a pH 7,0; esto con el fin de estudiar la cinética...