cinética enzimatica

MARCO TEORICO

En una reacción catalizada por un enzima la sustancia sobre la que actúa la
enzima es conocida como sustrato este se une a una región concreta de la enzima
denominada centro activo.
Un sitio de unión está formado por los aminoácidos que están en contacto directo
con el sustrato. Un sitio catalítico está formado por los aminoácidos directamente
implicados en el mecanismo dela reacción.
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones químicas que son
catalizadas por las enzimas. El estudio de la cinética y de la dinámica química de
una enzima permite explicar los detalles de su mecanismo catalítico, su papel en
el metabolismo, cómo es controlada su actividad en la célula y cómo puede ser
inhibida su actividad por fármacos o venenos o potenciada porotro tipo de
moléculas.
Las enzimas, en su mayoría, proteínas con la capacidad de manipular otras
moléculas, denominadas sustratos
El proceso fue modelizado por Michaelis y Menten y le permitio obtener una
ecuación, ecuación de Michaelis-Mente en donde la velocidad de la acción de un
enzima es función de la cantidad de sustrato presente, la cantidad de enzima y las
características delenzima, la afinidad del enzima por el sustrato y el poder
catalítico del enzima:

La Km nos da una idea la afinidad que tiene el enzima por su sustrato, cuanto
mayor es Km menor es la afinidad (predominan las formas E y S libres), cuanto
menor es Km mayor es la afinidad (predomina la forma ES).
La sacarosa es un carbohidrato constituido por la condensación de dos
monosacáridos: Fructosa yGlucosa, por lo que es un disacárido. Su nombre
común es azúcar de mesa y es el disacárido con mayor distribución en la
naturaleza.
Algunos azúcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes
oxidantes suaves como el ion Fe3+ o Cu2+

Esta característica radica en la .presencia de un grupo carbonilo libre, el cual es
oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellosazúcares con un grupo
carbonilo libre son llamados azúcares reductores y aquellos en los que el grupo
carbonilo se encuentra combinado en unión glicosídica se conocen como azúcares
no reductores
La sacarasa rompe enlaces alfa 1-2de la sacarosa dando como productos glucosa
más fructosa (azúcares reductores)
La velocidad de una reacción catalizada por un enzima depende de:





Laconcentración de moléculas de sustrato [S]
La temperatura
La presencia de inhibidores
El pH del medio, que afecta a la conformación (estructura espacial) de la
molécula enzimática

Pro cedim iento
1. Curva Patrón : Prepare una curva de a zúcares reductores, ta l como
se ind ica en el sigu iente cuadro:

Tubos

Reactivo s

1

2

3

4

5

6

7

8

Glucosa-Fructosa 0.005 M

0.00.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4

Sacarosa 0.3M

1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

Regulador de acetato s 0.05 M,
pH 4.7

0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Agua dest ilada pH 6.5

1.5 1.3 1.1 0.9 0.7 0.5 0.3 0.1

Reactivo de Ácido 3,5
Dinitrosa licílico

2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
Mezclar perfectamente

Colocarlos todos los en baño María a e bullición durante cinco m inutos.Enfriar los tubos

Tomar alícuotas de 2.5 mL y d ilu ir con 7.5 mL de agua destilada pH
6.5.
Leer la absorbancia de los tubos en el espectrofotómetro a una
longitud de onda de 540 nm usando el tubo 1 como b lanco.

2. Efecto de la con centración del sustrato sobre la velocidad de la
reacción en zimát ica: Prepare una serie de tubos según se indica
en el sigu iente cuadro:

TubosReactivo s

1

Sacarosa 0.3 m

2

3

4

5

6

7

8

9

0.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.8 0.5 0.3 0.1

Regulador de acetato s 0.05 M
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
pH 4.7
Agua dest ilada pH 6.5

2.5 0.0 0.5 1.0 1.5 1.7 2.0 2.2 2.4

Preincubar todos los tubos en baño Ma ría a 25 o C durante 5 m inutos
Enzima 25 microgramos/mL

0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1

Incubar...