Cinética Enzimática 11

CINÉTICA ENZIMÁTICA
Constanza Araya, Gladys Astudillo, Fernanda Guerra, Fernanda Silva.
Feeer.guerra@gmail.com

Carlos Cárcamo Díaz.


RESUMEN

Utilizando el método de ensayo indirecto discontinuo se determinó las velocidades de la reacción y los efectos que tiene el pH y la temperatura en la actividad enzimática de la enzima fosfatasa alcalina.

Palabras claves: ensayo indirectodiscontinuo; velocidad de reacción; pH; enzima; actividad enzimática.

INTRODUCCION Y OBJETIVOS

Una enzima es una proteína que tiene como característica ser un biocatalizador ya que, es un agente externo a la reacción química que mejora las condiciones del medio para que ocurra la reacción disminuyendo la energía de activación y aumentando la velocidad de reacción, logrando formar producto.

Las enzimasse ven afectadas por múltiples factores, como por ejemplo, concentración de enzima, concentración de ligandos (sustratos, productos, inhibidores y activadores), pH, fuerza iónica y temperatura, entre otras.

Estas enzimas responden al comportamiento de Michaelis-Menten. En un gráfico, estas enzimas generan una hipérbola que consta de una velocidad máxima (Parámetro cinético que indica la velocidadmáxima alcanzada cuando la enzima está saturada con sustrato), una velocidad máxima media y un Km (concentración de sustrato a la que la velocidad inicial es ½V.max, también una medida de la afinidad del enzima por sustrato).

Para determinar las velocidades de reacción de una enzima se utilizan distintos métodos, uno de ellos es el ensayo indirecto discontinuo, en donde la reacción se detiene aun tiempo específico y se trata la mezcla para producir un cambio en las propiedades del sustrato o del producto. Hay una fórmula que permite realizar el cálculo de la velocidad inicial la cual es:

V = A – C0* 1 * V * fd* fe
* lt v

Los objetivos de estos laboratorios son determinar el pH y temperatura óptima de la enzima en estudio: fosfatasa alcalina.

RESULTADOS

1. Efecto del pH enla actividad enzimática de la Fosfatasa Alcalina.

pH
Absorbancia obtenida
Tubo 1
3,0
0,064
Tubo 2
6,0
0,068
Tubo 3
8,0
0,165
Tubo 4
11
0,052

Calculo de la actividad enzimática para cada tubo

V = A – Co x 1 x Vensayox Fdensayo x Fdenzima
ε x L 15 Venzima


Tubo 1:

V: 0,064 – 0 x1 x 4,1ml x 7,1 x 1 16, 68mM-1cm-1x1cm 15min 0,1 ml 4,1

V = 3,83x10-3 x 0,06 x41 x 1,73 x 1
V = 0,016 UI/ml



Tubo 2:

V: 0,068 – 0x 1 x 4,1ml x 7,1 x 1
16, 68mM-1cm-1x1cm 15min 0,1 ml 4,1

V = 4,07x10-3 x 0,06 x 41 x 1,73 x 1
V = 0,017 UI/ml




Tubo 3:

V: 0,165– 0 x 1 x 4,1ml x 7,1 x 1
16, 68mM-1cm-1x1cm 15min 0,1 ml 4,1


V = 9,89x10-3 x 0,06 x 41 x 1,73 x 1
V = 0,042 UI/ml

Tubo 4:

V: 0,052 – 0 x 1 x4,1ml x 7,1x 1
16, 68mM-1cm-1x1cm 15min 0,1 ml 4,1

V = 3,11x10-3 x 0,06 x 41 x 1,73 x 1
V = 0,013 UI/ml

“Grafico nº 1”
















2. Efecto de la Temperatura en la actividad enzimática de la Fosfatasa Alcalina.




Cálculo de la actividad enzimática para cada tubo.

V =A – Co x 1 x Vensayox Fdensayo x Fdenzima
ε x L 15 Venzima

Tubo 1(C) y2 (R):

V = 0,010– 0.005 x1 x 4.1mlx 7,1 x 1
16, 68mM-1cm-1 x 1cm 15min 0,1 ml 4,1

V = 2.99x10-4x 0,06 x 41 x 1,73 x 1
V = 0.00127UI/mL

Tubo 3(C) y 4(R):

V = 0,126– 0.006 x1 x 4.1ml x 7,1 x 1
16, 68mM-1cm-1 x 1cm 15min 0,1 ml 4,1

V = 7,19x10-3x 0,06 x 41 x 1,73 x 1
V = 0,031UI/mL

Tubo 5 ( C) y 6 ( R):

V = 0,260– 0.010 x1 x 4.1ml x 7,1 x 1
16,68mM-1cm-1 x 1cm 15min 0,1 ml 4,1

V = 0.014x 0,06 x 41 x 1,73 x 1
V = 0,059UI/mL

Tubo 7 ( C) y 8 ( R):

V = 0,129– 0.099 x1 x 4.1ml x 7,1 x 1
16, 68mM-1cm-1 x 1cm 15min 0,1 ml 4,1

V = 1.79x10-3x 0,06 x 40 x 1,73
V = 0.00761UI/mL







“Grafico nº 2”
















DISCUSION

La actividad catalítica de una enzima se ve afectada por factores como la...