Clonación molecular o del adn

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Clonación Molecular o del ADN

La clonación molecular o del ADN consiste en la obtención de múltiples copias de un determinado fragmento de ADN. Este tipo de clonación responde más a la definición que aporta la Ingeniería Genética, pues como habíamos mencionado anteriormente, se da una práctica más a nivel génico para otorgar características especiales a clones o principalmente a especies endesarrollo embrionario.

En carácter resumido, este proceso puede sintetizarse en 3 pasos básicos:

- Ampliación: Se amplifica la secuencia o genes determinados a utilizar mediante dos procesos, los cuales pueden ser: Mediante vectores de clonamiento o por la técnica de PCR.

- Transfección: Se introduce la secuencia formada dentro de células. Esta secuencia se implanta en las células mediantela introducción de un plásmido con los genes que previamente se buscaban introducir en células, ya sean vegetales o de otras bacterias.

- Selección: Finalmente se seleccionan las células que han sido transfectadas con éxito con el nuevo ADN. Luego de esto, podemos integrar a algún ser vivo estas células “remodeladas” para darle algún efecto específico.

1.- Ampliación

Mediante Vectores deClonamiento: Los vectores son elementos genéticos capaces de duplicar, de forma autónoma, el ADN que contienen. Se denominan vectores de clonamiento porque en ellos puede insertarse un fragmento de ADN que contiene un gen de interés y posteriormente generar múltiples copias del mismo. Los principales vectores usados en ingeniería genética son los plásmidos y algunos virus, pero nos centraremos enlos plásmidos como fuente de ampliación de estos genes de interés.

Para empezar, los plásmidos son moléculas de ADN circular de doble hélice que se pueden encontrar en las bacterias, y se autorreplican debido a que poseen un origen de replicación propio y se pueden transmitir a otras bacterias. Ambos procesos los pueden realizar independientemente del cromosoma bacteriano. Los genescodificados por los plásmidos al expresarse en la célula en la que se hospedan le aportan a éstas características especiales que le permiten identificar la presencia del plásmido. Por ejemplo, los genes de un plásmido pueden codificar para formar proteínas que degradan algún antibiótico en específico. Por lo tanto, si una bacteria integra este plásmido, por ejemplo porque otra bacteria replicó el suyo y selo entregó, y los genes se expresan mediante la formación de estas proteínas, la bacteria va a sobrevivir en un medio que contiene el antibiótico respectivo.

Respecto a lo anterior, vale decir que no todos los plásmidos cumplen con los requisitos para poder utilizarse en la ampliación de algún segmento de ADN. Las características que debe poseer un plásmido para ser utilizado como un vector declonamiento, son:

1.- Poseer un origen de replicación eficiente, que permita que en condiciones de cultivo normales se genere un mínimo de 15 a 20 copias de plásmidos en cada célula bacteriana.

2.- Poseer un marcador de selección, es decir, poseer aquel plásmido que debe codificar para hacer proteínas que otorguen resistencia a los antibióticos a utilizar y, de esta forma, distinguir lasbacterias de alguna cepa que contienen el plásmido de aquellas que no lo poseen. Con este requisito, ya se conocen las bacterias que podrán ser luego utilizadas para insertarle el o los genes de interés.

3.- Poseer la denominada caja de clonamiento, es decir, una pequeña región con por lo menos una secuencia genética palindrómica donde puedan actuar las enzimas de restricción. Respecto a estasproteínas, ahondaremos en el tema.

Las enzimas denominadas de “restricción”, son enzimas bacterianas que tienen la capacidad de cortar la doble hebra de ADN de manera transversal (y esto implica cortar enlaces fosfodiester y puentes de hidrógeno) y separar sus partes, por lo que estas enzimas son especialmente particulares y únicas. Además, frente a este hecho con la enzima, el ADN no busca...
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