Coca Cola

Fecha de entrega: 21/mayo/2012

INTRODUCCION
Una mutación es un cambio heredable en la secuencia de bases de los ácidos nucleicos que constituyen el genoma de un organismo; ésta se produce en condiciones naturales con baja frecuencia y se deben fundamentalmente a errores en los procesos de replicación del ADN. Además de las mutaciones espontáneas, pueden ocurrir mutaciones inducidas,provocadas por agentes mutagénicos (químicos, físicos o biológicos) que proporcionan una herramienta para introducir cambios en el genoma bacteriano en el laboratorio.(Betancor L. 2008)
En los organismos superiores monitorear una mutación resulta difícil, no solo porque el número de individuos es mucho más pequeño, en comparación con el de los microorganismos, sino también por tratarse de organismosdiploides, lo que supone que una mutación en un cromosoma que sea recesiva queda culta y no puede contabilizarse. ( Madigan, Clark, 2009)
Mas sin embargo, debido a su gran velocidad de reproducción, facilidad de análisis en laboratorio y la amplia diversidad que se puede obtener de mutantes generados en laboratorio, las bacterias se han descrito como un excelente modelo para estudiar el proceso de laevolución (Anderson. Kevin 2005)
Algunas mutaciones pueden conferir al mutante una ventaja frente a la cepa que le dio origen, (cepas tipo “salvaje”) bajo ciertas condiciones ambientales, de manera que la progenie de dicha célula mutante es capaz de superar el crecimiento de la cepa original y sustituirla. (Valdez D 2001.). Este es el caso de las mutaciones que confieren resistencia a losantibióticos, en las que el mutante resistente se seleccionará en un ambiente en el que las bacterias estén expuestas al antibiótico en cuestión. Este tipo de mutaciones se denominan selectivas. (Betancor L. 2008)
En esta práctica trabajaremos con E.coli una de las bacterias más utilizadas en estudios genéticos, debido a que en ella se han encontrado una decena de genes de los que se han aisladomutantes que aumentan la frecuencia de mutación espontanea de las bacterias que los poseen (Sánchez Alfonso 1982).
En caso concreto se intentara identificar el origen de las mutaciones, ya sean estas mutaciones espontaneas o inducidas utilizando como marco de referencia la resistencia ala ampicilina, el cual actuara como condición de estrés, ya que la adaptación de los organismos al medio ambiente seda a través de una serie de procesos entre los cuales figuran la respuesta al estrés. El estrés se presenta cuando los factores físicos, químicos y/o bióticos del entorno llevan a un organismo más allá de los límites de su nicho fundamental. (Nagel Rosa 2007)

OBJETIVO.
Probar de manera experimental la presencia de mutaciones espontaneas, en un cultivo de E.coli utilizando un medio elaboradocon ampicilina para seleccionar mutantes resistentes a antibióticos
Materiales y Métodos
1. Material proporcionado
1 matraz con 90 ml de caldo nutritivo
1 matraz con 50 ml de caldo nutritivo
1 tubo con ampicilina
4 cajas petri por persona
1 tubo con 2ml de E.coli
1 Mechero
1 Micropipeta
2. Se preparó el medio de cultivo, agregando 45 µl de ampicilina almatraz con 90 ml de caldo nutritivo. Después se vació en 2 cajas petri inclinadas con la finalidad de formar una zona donde no hubiese ampicilina en la placa. Se espero a que solidificaran.
4. Se marcaron las zonas 0, de 25 y de 50 donde estaba la ampicilina, además de la altura a donde había quedado.
5. Se agrego una segunda capa de medio de cultivo, esta vez sin ampicilina, con la finalidad deformar un gradiente de concentración en las placas. Esperamos a que solidificaran
6. Se inocularon 500 µl de E.coli en la placa y se incubaron.
7. Se observo el crecimiento en las placas, y se procedió a picar colonias de las diferentes zonas en 2 placas con concentraciones de ampicilina de 0 y 25 %
8- Se observaron los resultados

Resultados.
Tabla 1. Resultados de la práctica. Conteo de...