colesterol

PRACTICA N° 5

TEMA: Cuantificación de metabolitos secundarios por HPLC, cuantificación de cafeína en tintura de guayusa.
OBJETIVO GENERAL:
Cuantificar la concentración de cafeína en unatintura de guayusa por cromatografía líquida de alta resolución
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
1. Determinar los ppm de cafeína presentes en la Ilex guayusa
MARCO TEÓRICO
HPLC.
Representa una evolucióninstrumental.
En pocos minutos se efectúan separaciones de mezclas complejas.
En ciertas condiciones se pueden determinar la composición cuantitativa y obtener decisiva información sobre la sustanciaanalizada.
El flujo de la fase móvil (líquido de baja viscosidad) viene asegurado de un sistema de bombas.
A la salida de la columna los varios componentes vienen revelados automáticamente

RECURSOSUTILIZADOS
MATERIALES
DESCRIPCION
CANTIDAD

POR CURSO
POR GRUPO
Erlenmeyer de 150 mL
5
1
Embudo de separación
5
1
Vasos de precipitación 50 mL
5
1
Balones aforados de 10 ml
51

REACTIVOS
DESCRIPCION
CANTIDAD

POR CURSO
POR GRUPO
Éter etílico
200 mL
40
Tintura de guayusa al 2 %
100 mL
20
Cloruro de metilo
200 mL
40
Hidróxido de amonio al 35%
10 mL
2Soluciones estándar de cafeína de 500, 300, 200 y 100 ppm
10 ml/cda una

Agua destilada
500 mL
100
Fase móvil metanol/agua/ácido acético glacial/
500 mL


EQUIPOS
DESCRIPCION
CANTIDADPOR CURSO
POR GRUPO
HPLC
1

ultrasonido
1


PROCEDIMIENTO
Se toman 5mL de tintura de guayusa al 2%.
Se añaden 1mL de solución de hidróxido de amonio al 35% y se agita.
Se añaden 4mL decloruro de metileno y se extrae en el embudo separador 2 veces.
Se recoge la fase apolar en un balon aforado de 25mL y se afora con cloruro de metileno.
Se etiqueta el balón, y se cubre con papelaluminio, para la próxima clase.
Se estabiliza el HPLC, con la fase móvil descrita.
Se toman 2mL de la muestra y se filtra.
Se inyectan 2 estándares de 200ppm
Se inyectan las muestras una por grupo
Se...