Coloración de estructuras bacterianas

COLORACIÓN DE ESTRUCTURAS BACTERIANAS

OBJETIVOS GENERALES

• Conocer la utilidad de las principales coloraciones que nos permiten identificar algunas estructuras bacterianas (pared, capsula, espora y endospora)

• Interpretar los fundamentos de las diferentes técnicas a realizar

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Desarrollar las diferentes técnicas de coloración empleadas para lasestructuras microbianas
• Reconocer las bacterias Gram (+) y Gram (-) por medio de la tinción de la pared celular
• Visualizar las estructuras que le confieren protección a la bacteria en condiciones adversas
• Identificar la estructura que le proporciona un importante factor de virulencia a la bacteria

JUSTIFICACIÓN

Los métodos de coloración han sido determinantes para lacaracterización y estudio de algunos componentes celulares a nivel clínico (ayuda diagnóstica) y como parte del control de los procesos industriales. En ambos casos se aprovecha el comportamiento y afinidad de estos componentes frente a los colorantes y la capacidad de penetración de este último, dependiendo de su naturaleza y composición.

La célula bacteriana se compone de estructuras vitales comola pared y otras no esenciales (capsula y espora) que le confieren virulencia y protección contra las condiciones adversas del medio y otros microorganismos (fagocitosis), siendo importante detectar su presencia que puede ser indicadora de patogenicidad.

Practica # 1

COLORACIÓN DE GRAM

La tinción propuesta por el médico danés Christian Gram en 1984, es una de las tinciones diferencialesmás utilizadas en bacteriología, que clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas de Gram positivas y Gram negativas. El método se fundamenta en el hecho de que el colorante primario (cristal violeta) tiñe por igual a todas las bacterias, pero la combinación con el colorante es más permanente en los Gram positivos.

Para establecer la diferenciación en estos dos grupos, se aplica undisolvente del colorante primario que no tiene efecto sobre el grupo de microorganismos que lo retienen firmemente, pero elimina de aquellos que no son capaces de retenerlo, quedando por lo tanto completamente decolorados. En estas circunstancias, sería muy difícil su observación por lo que es preciso tratarlos con otro colorante llamado secundario, como la safranina. Este colorante no modifica elcolor de los microorganismos que habían retenido el color primario, pero tiñe a los microorganismos decolorados

Estas diferencias de tinción de las bacterias se explican por cambios en la composición química y estructura de las paredes celulares, que facilitan la retención o eliminación del colorante primario después del proceso de decoloración

MATERIALES

Cristal Violeta
Alcohol acetonaLugol
Safranina
Aceite de inmersión
Portaobjetos
Asas bacteriológicas estériles
Cultivo o muestra de estudio
Mechero
Fósforos
Cronómetros
Microscopio
Pipetas Pasteur

PROCEDIMIENTO

Fijación de frotis
• Con la ayuda de un mechero, flamear un asa bacteriológica y esperar que enfríe un poco.
• Tomar el asa (previamente flameada) y con ésta tomar un poco de muestra.
•Una vez obtenida una pequeña cantidad de la muestra (con el asa), hacer que ésta tenga contacto con una lámina portaobjetos, al cual previamente se le han agregado 2 gotas de agua esterilizada, allí se deposita la muestra contenida en el asa.
• Con el asa (conteniendo la muestra) sobre la lámina portaobjetos, proceder a realizar la extensión de la muestra en el portaobjetos mediantemovimientos giratorios (dar vueltas con el asa) sobre la lámina, de tal forma que al terminar la extensión, tengamos como producto una espiral en la parte media de la lámina. (Debe tener de 10 a 20 mm de diámetro)
• Esperar que seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (sólo se pasa por la llama), puesto que el...