Congelacion De Celulas
Páginas: 2 (283 palabras)
Publicado: 11 de junio de 2012
Universidad del Sagrado Corazón
Departamento de Ciencias Naturales
Técnicas de Cultivo Celular
BIO 225-1
Congelación de Células
Objetivo:
Mantener el cultivo de la faselogarítmica tardía, preparar una alta densidad de células en suspensión y congelarla suavemente por medio de un preservativo.
Protocolo:
1- Revise el cultivo de lo siguiente:
a)Crecimiento saludable
b) Libre de contaminación
c) Características específicas
2- Mantener el cultivo hasta la fase logarítmica tardía, si está utilizando una mono capa, tripsine ycuente las células, si está utilizando una suspensión, cuente y centrifugue las células.
3- Diluya uno de los preservativos en crecimiento a medio, para hacer un congelamiento amedio y añada dimetilsulfóxido (DMSO) a 5-10%.
4- Re suspender las células en medio de congelación en aproximadamente
1 X 106 -1 X 107 células/ml. No es recomendable colocar lasampollas en hielo en un intento de minimizar el deterioro de las células. Un retraso de más de 30 minutos a temperatura de cuarto, no es perjudicial cuando se utiliza DMSO y esbeneficioso cuando se usa glicerol.
5- Dispense la suspensión de células en ampollas prelabeled y selle las apollas.
6- Coloque las ampollas en bastones para el almacenamiento odejarlas sueltas para el almacenaje del cajón.
7- Congele las ampollas…
8- Cuando las ampollas alcancen una temperatura de -70°C, transfiéralos a un líquido N2 congelado. Estatransferencia debe hacerse rápidamente, que las ampollas se recalienten a ~10°C/min, y las células de deteriorarán rápido si la temperatura alcanza por encima de -50°C.
9- Cuando lasampollas estén a salvo, colóquelos en el congelador, esté seguro que las entradas asignadas estén hechas en el índice congelador.
Descongelación de células
Objetivos:
Departamento de Ciencias Naturales
Técnicas de Cultivo Celular
BIO 225-1
Congelación de Células
Objetivo:
Mantener el cultivo de la faselogarítmica tardía, preparar una alta densidad de células en suspensión y congelarla suavemente por medio de un preservativo.
Protocolo:
1- Revise el cultivo de lo siguiente:
a)Crecimiento saludable
b) Libre de contaminación
c) Características específicas
2- Mantener el cultivo hasta la fase logarítmica tardía, si está utilizando una mono capa, tripsine ycuente las células, si está utilizando una suspensión, cuente y centrifugue las células.
3- Diluya uno de los preservativos en crecimiento a medio, para hacer un congelamiento amedio y añada dimetilsulfóxido (DMSO) a 5-10%.
4- Re suspender las células en medio de congelación en aproximadamente
1 X 106 -1 X 107 células/ml. No es recomendable colocar lasampollas en hielo en un intento de minimizar el deterioro de las células. Un retraso de más de 30 minutos a temperatura de cuarto, no es perjudicial cuando se utiliza DMSO y esbeneficioso cuando se usa glicerol.
5- Dispense la suspensión de células en ampollas prelabeled y selle las apollas.
6- Coloque las ampollas en bastones para el almacenamiento odejarlas sueltas para el almacenaje del cajón.
7- Congele las ampollas…
8- Cuando las ampollas alcancen una temperatura de -70°C, transfiéralos a un líquido N2 congelado. Estatransferencia debe hacerse rápidamente, que las ampollas se recalienten a ~10°C/min, y las células de deteriorarán rápido si la temperatura alcanza por encima de -50°C.
9- Cuando lasampollas estén a salvo, colóquelos en el congelador, esté seguro que las entradas asignadas estén hechas en el índice congelador.
Descongelación de células
Objetivos:
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