Cromatografia de aminoacidos

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  • Publicado : 30 de octubre de 2011
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OBJETIVO
 Separar mediante cromatografía en capa delgada los componentes de una mezcla de lípidos.
INTRODUCCION
La caracterización de los lípidos, procedentes de grasas animales o aceites vegetales, ha sido una ardua tarea, marcada por la determinación de la composición de los ácidos grasos que los forman. Los lípidos pueden clasificarse en lípidos neutros, como acilgliceroles y ésteres decolesterol, y lípidos anfipáticos, los cuales están compuestos por una porción polar y otra no polar, como fosfolípidos y colesterol libre. Dada su estructura molecular, son sustancias poco solubles en solventes polares, lo que permite aislarlos de los tejidos fácilmente utilizando solventes orgánicos.(2)

La cromatografía en capa fina es una técnica instrumental que ha adquirido granimportancia para análisis de moléculas biológicas como los lípidos , ya que reúne las ventajas de la cromatografía en papel, y algunas de las de la cromatografía líquida en columna. La disposición experimental es muy similar a la de la primera con la diferencia de que el papel, como soporte de la fase estacionaria, ha sido sustituido por una fina capa de un material adsorbente tal como el gel de sílice(SiO2), la alúmina (Al2O3) o el óxido de magnesio (MgO).


Las distintas clases de lípidos se separan según los Rf, los lípidos menos polares tienen el Rf más alto. El revelado de las manchas puede hacerse con vapores de Yodo que tiñen a los lípidos de color pardo sobre un fondo amarillento o mediante reactivos específicos, después de su separación los lípidos pueden eluirse del silicagel para sudeterminación cuantitativa o para el análisis de ácidos grasos. (2)
PLANTEAMIENTO
Se realizará una determinación cualitativa de los componentes presentes en la muestra mediante la técnica de Cromatografía en capa fina, una vez revelado el cromatograma se calculará el valor del Factor de retención para cada uno de ellos.

MATERIAL REACTIVOS
Tubos capilares Fase móvil. Mezcla deéter de petróleo, éter etílico y acido
Frasco con tapón de rosca acético en una proporción 90:10:1 (v/v/v).
2 Portaobjetos Fase estacionaria. Suspensión de gel de sílice
Parrilla eléctrica mezclar 20 g de gel de sílice, especial para cromatografía
en capa delgada con 20 mL de cloroformo-etanol (2:1 v/v)
y 0.5 mL de acido sulfúrico conc. (94% p/p).
Patrones de lípidos recientementepreparados: soluciones
al 5% (p/v) de aceite vegetal, manteca de cerdo y colesterol en cloroformo

CUESTIONARIO
1.- Explicar y discutir las semejanzas y diferencias entre la cromatografía en papel y en capa fina.
La cromatografía en papel es una forma de cromatografía de partición combinada con cromatografía de adsorción, en la cual la fase estacionaria es el agua absorbida que hay en el papel yel soporte es el mismo papel.
 La fase móvil es una solución que consiste en un disolvente o de una mezcla de varios líquidos que contiene agua. Sobre el papel se seca una gota de extracto de la Cuando la fase móvil ha saturado el papel hasta una distancia predeterminada para lograr la separación, se saca el papel de la cámara y se desarrolla el cromatograma por aspersión de sustancias, que lohagan visible.
 En el caso de sustancias coloridas, tales como colorantes para alimentos, la separación puede ser evidente sin el uso de agentes reveladores. Las sustancias no polares también se pueden separar cubriendo el papel con compuestos no polares y utilizando disolventes polares como fase móvil.
 La cromatografía en papel es una técnica barata, pero por lo general lenta, conlimitaciones por el uso de agentes que se rocían, algunas de las cuales pueden destruir rápidamente el papel.
 Las manchas tienden a ser difusas. (4)
En cromatografía en capa fina, un sólido, sorbente o soporte de la fase estacionaria, se extiende en forma de capa sobre el plano de una superficie rígida, normalmente una capa de vidrio o polietileno, de forma que la fase móvil fluye a través del...
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