cromatografia

Que es la cromatografía:
Es una técnica de separación de componentes de una mezcla presente en una fase denominada fase móvil, cuando se mueve en relación a otra fase denominada fase estacionaria.
En todas las separaciones cromatograficas la muestra se disuelve en una fase móvil, que puede ser un gas, un liquido o fluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través de una faseestacionaria inmiscible, es decir, que no se puede mezclar con otra sustancia, la cual se mantiene fija en una columna sobre una superficie solida. Las fases se elijen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con mas fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por elcontrario los componentes que unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas discriminadas que pueden analizarse cualitativa y cuantitativamente.
Historia de la cromatografía:
Mikhail tsvett empleó una fase inmóvil de polvo de tiza (carbonato de calcio) una fase móvil de disulfuro decarbono para separar los pigmentos vegetales que estaba estudiando. Se le ocurrió introducir la tiza en una columna y luego hizo pasar por ellas los extractos vegetales que contenían los pigmentos que deseaba purificar (clorofilas->verdes, carotenoides->naranjas y xantofilas->amarillos). Observó que se podían separar muy bien los colores (pigmentos) en forma de anillos a lo largo de la columna, perono bautizó aún la técnica con ningún nombre en el artículo que publicó eln ruso al respecto. Utilizó por primera vez el término cromatografía, del griego khrmatos color y graphia escritura.
Otros piensan que en la mente de Tswett, cromatografía querría decir dado que su apellido significa en ruso COLOR.
Cromatografia de fase móvil líquida:
Cromatografía intercambio iónico
Cromatografía porfiltración en gel
Cromatografía por absorción







Cromatografia de fase estacionaria líquida
Cromatografía por afinidad


Cromatografía exclusión por tamaño
Cromatografía de partición
Cromatografía en columna
Cromatografía por interacción hidrofobica

Las partículas cargadas negativamente se unen a la matriz sólida cargada positivamente, y son retenidas.
Las partículascargadas positivamente son rechazadas por la matriz sólida cargada positivamente son eluidas.
La evolución de las partículas cargadas negativamente se consigue cambiando el pH disolvente hasta igualarlo a su punto isoeléctrico o hasta invertir su carga neta.
En un segundo tipo de cromatografía líquida, denominada cromatografía por intercambio iónico , las proteínas se separan sobre la base de ladiferencia de sus cargas . En esta técnica se utilizan perlas especialmente modificadas
Es un tipo de cromatografía liquida,denominada cromatografía por intercambio oinico,las proteínas se separan sobre la base de la diferencia de sus cargas. En esta técnica se utiliza perlas especialmente modificadas, cuyas superficies están cubiertas por grupos amino o carboxilo, por lo que portan cargaspositivas(NH3+) o negativas(COO-) a pH neutro.
Las proteínas de una mezcla portan distintas cargas netas a un pH determinado. Cuando una mezcla de proteínas fluya a través de una columna con perlas cargadas positivamente, solo las de carga neta negativa (proteínas acidas) se adhieren a las perlas; las neutras y las básicas fluyen sin impedimento a través de la columna. Luego las proteínas acidas eluyenselectivamente mediante el pasaje de un gradiente de concentraciones creciente de una sal a través de la columna.

TIPOS DE SOPORTE:
Dextrán con enlaces cruzados
Agarosa con enlaces cruzado (derivado de algas)
Poliacrilamida
Celulosa
Poliestireno
Sílice




Las bolas de gel están recubiertas de un ligando por el que tiene afinidad alguna de las proteínas a aislar. Al pasar la...