Cromatografía en capa fina

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

INTRODUCCIÓN

El término cromatografía se refiere de forma general a procedimientos de separación de componentes de una muestra por distribución entre dos fases, una estacionaria y otra móvil. La cromatografía es el método analítico más utilizado en la separación, identificación y determinación cuantitativa de los componentes de mezclas complejas. A continuación serealiza una breve descripción de las distintas técnicas cromatográficas, excepto de la cromatografía de capa fina, de la que se incluye un comentario más extenso dado que es la técnica elegida para el desarrollo de la clase práctica de laboratorio correspondiente.

Clasificación de las técnicas cromatográficas:
Pueden utilizarse distintas clasificaciones de las técnicas cromatográficas enfunción del criterio que se establezca.
- Según el fenómeno físico-químico que da lugar a la separación:
• Cromatografía de adsorción:

La fase estacionaria es un sólido sobre el que se adsorben los componentes de la muestra. Los componentes se distribuyen entre las dos fases por un proceso de adsorción-desorción.
• Cromatografía de partición:

La fase estacionaria es unlíquido sostenido por un sólido inerte.
• Cromatografías de intercambio iónico y de exclusión molecular:

En la cromatografía de intercambio iónico la fase estacionaria es una resina de intercambio iónico, basándose la separación en el equilibrio que se establece en el intercambio de iones.
• Cromatografía de exclusión molecular:

En la cromatografía de exclusión molecular,los componentes se separan según el tamaño de sus moléculas, hjteniendo la fase estacionaria una estructura parecida a un tamiz.
• Cromatografía de afinidad:

La muestra se va a unir a un ligando como un anticuerpo, iones metálicos, etc.
- Según el instrumental: puede ser plana (en papel o en capa fina) o en columna (exclusión molecular, intercambio iónico y afinidad).
- Según elestado físico de las fases, que pueden ser líquidas o sólidas y hay varias combinaciones.

Cromatografía de capa fina
La cromatografía de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar moléculas relativamente pequeñas. Es una cromatografía de adsorción, plana, la fase estacionaria es sólida y la móvil es líquida.
En la biología celular se utiliza frecuentemente para separar azúcaressimples, lípidos, aminoácidos, nucleótidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de polipéptidos y ácidos nucléicos. Al igual que otras cromatografías, consiste de una fase estacionaria y una fase móvil y el principio es el mismo: la sustancia de interés se adherirá a la fase estacionaria o se moverá con la fase móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional ala afinidad por la fase estacionaria.
El uso de la cromatografía está ampliamente extendido en el análisis de alimentos, medicinas, sangre, productos petrolíferos y de fisión radiactiva.
Proceso de Adsorción: La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie del material por la acción de fuerzas electrostáticas (fuerzas de Van der. Waals, puentes de Hidrógeno, efectos inductivos,etc.). Luego, cuando la capa es expuesta a un flujo por acción capilar, se inicia una competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente y la sustancia con el solvente.
En la cromatografía de capa fina intervienen los fenómenos de adsorción y dilución, por consiguiente es necesario tener en cuenta la polaridad tanto de la sustancia a arrastrar como del disolvente.
La fase estacionariapuede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie sólida (una placa de vidrio, aluminio, plástico o papel). Esta superficie sólida puede ser rígida o flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento dependerá del tipo de moléculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas placas con indicadores...