CULTIVO DE MICROORGANISMOS

Práctica: “CULTIVO DE MICROORGANISMOS”

OBJETIVO:
El objetivo de la experiencia a realizar consiste en preparar un cultivo de microorganismos tanto en medio sólido como en líquido, en este caso el microorganismo que utilizaremos será Escherichia Coli, con la intención de que los alumnos nos familiaricemos con la preparación de medios de cultivo y el cultivo de microorganismos enlaboratorio.

INTRODUCCIÓN:
La práctica que vamos a llevar a cabo se basa en cultivar microorganismos; por ello, antes de comenzar su realización hemos de informarnos sobre en qué consiste dicha actividad.
Un cultivo de microorganismos se basa en proporcionarle a éstos las condiciones físicas, químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. Generalmente, podemosdistinguir cultivos líquidos y sólidos en función de las características del medio en el que se lleven a cabo y cultivos discontinuos y continuos en función de la disponibilidad de nutrientes en el medio.
Dicho esto, nos centraremos en la preparación de un cultivo en medio sólido y otro en medio líquido para llevar a cabo esta experiencia, de manera que la diferencia que existe entre ambos mediosque elaboraremos radicará en sus composiciones, pues el medio sólido contendrá agar mientras que el líquido no.

MATERIALES:
Extracto de levadura.
Bacto-triptona.
NaCl.
Agar al 2 %.
Agua destilada.
Autoclave.
5 placas de Petri (1 de ellas con colonia de Escherichia Coli).
Mechero Bunsen.
Matraz erlenmeyer 250 ml.
Frascos de rosca 250 ml.
Probeta 250 ml.
Estufa.
Espátula.
Recipientespara pesar.
Asa.
Granatario.

PROCEDIMIENTO:
Comenzamos el desarrollo de la práctica elaborando los medios en los posteriormente realizaremos el cultivo de Escherichia Coli:
Preparación de medio líquido:
Para preparar el medio líquido destinado a la elaboración de nuestro cultivo añadimos 100 ml de agua destilada a un matraz erlenmeyer de 250 ml de capacidad. Posteriormente, pesamos enun granatario sirviéndonos de pequeños recipientes de plástico y una espátula los siguientes productos: 0,63 g de extracto de levadura, 1,25 g de NaCl y 1,25 g de Bacto-triptona. Añadimos al matraz tales cantidades de productos y disolvemos bien hasta que la disolución quede homogénea; (de manera que el pH de la disolución se encuentre aproximadamente entre 7 y 7,5). Por último, tapamos la boca delmatraz con papel de aluminio e introducimos el medio preparado en el autoclave para conseguir su esterilización.

Preparación de medio sólido:
Para llevar a cabo la elaboración del medio sólido que utilizaremos, basta con introducir de nuevo en un frasco de rosca todos los productos (a igual cantidad) que echamos anteriormente en el matraz erlenmeyer para preparar el medio líquido. Una vezesto, añadimos además 2 g de agar al 2 %, disolvemos e introducimos el frasco en el autoclave hasta conseguir su esterilización. Cuando finalice el autoclave agitamos el frasco suavemente en caliente hasta terminar de disolver por completo el agar y preparamos cuatro placas de Petri además de otra en la que se encuentra una colonia de la bacteria que vamos a cultivar, Escherichia Coli, alrededor deun mechero Bunsen que hemos encendido para trabajar en el área alrededor de éste intentando así mantener unas condiciones de esterilidad. A continuación volcamos el medio que se encuentra en el frasco en cada una de las cuatro placas de Petri llenándolas aproximadamente por la mitad y lo dejamos solidificar situando las placas bajo el mechero encendido.

Una vez que hemos preparado los dosmedios de cultivo, procedemos a cultivar Escherichia Coli en cada uno de ellos:
Cultivo en medio líquido:
Este punto de la experiencia constituyó el punto de arranque de la cuarta práctica que realizamos posteriormente (aislamiento y análisis de ácidos nucleicos); de manera que el medio líquido que preparamos anteriormente fue utilizado para elaborar el gel en el que se llevaría a cabo el...