Cultivo en jaulas
Páginas: 2 (480 palabras)
Publicado: 5 de junio de 2013
TÉCNICA DE SOUTHERN
Que es y procedimiento
Esta técnica fue descrita por el Dr. Southern en 1975 y constituye el método más utilizado para analizar la estructura del ADN cortado por enzimas derestricción. Para la realización de esta técnica se debe extraer ADN genómico de linfocitos de sangre periférica para conocer el genotipo normal del individuo y ADN del tejido tumoral. Con una muestrade 10 cm3 de sangre se pueden extraer de 200 a 300 nanogramos de ADN con lo que se pueden realizar de 20 a 30 "digestiones" con enzimas de restricción.
Después de dicha digestión, el aproximadamentemillón de fragmentos de ADN obtenidos, se separan entre sí, según su tamaño, en un gel de agarosa, sometido a un campo de corriente continua en una cubeta de electroforesis. El ADN posee una cargaeléctrica negativa por lo que se desplaza hacia el polo positivo. Los fragmentos más pequeños se desplazan a mayor velocidad que los más grandes.
Con la electroforesis convencional se separan fragmentosentre 100 y 30.000 pares de bases. Cuando se marca con un colorante fluorescente (bromuro de etidio), el ADN separado de esta forma, aparece como una mancha homogénea de material fluorescente debido aque existen demasiados fragmentos de ADN como para que puedan diferenciarse entre sí.
La técnica de Southern Blotting permite identificar uno o dos fragmentos de ADN de interés en el aparentementeuniforme colección de millón de fragmentos cortados con la enzima de restricción. El siguiente paso consiste en la desnaturalización de los fragmentos de cadena doble para obtener fragmentos de cadenaúnica. Esto se logra con un bufer de Ph básico.
La molécula de cadena única es transferida desde el gel a una membrana de nilón o a papel de nitrocelulosa, ayudado por capilaridad. La identificaciónde uno o más fragmentos de interés se logra con una sonda específica marcada con radioactividad o colorimetría.
La sonda marcada se incuba con el filtro de nilón o nitrocelulosa...
Que es y procedimiento
Esta técnica fue descrita por el Dr. Southern en 1975 y constituye el método más utilizado para analizar la estructura del ADN cortado por enzimas derestricción. Para la realización de esta técnica se debe extraer ADN genómico de linfocitos de sangre periférica para conocer el genotipo normal del individuo y ADN del tejido tumoral. Con una muestrade 10 cm3 de sangre se pueden extraer de 200 a 300 nanogramos de ADN con lo que se pueden realizar de 20 a 30 "digestiones" con enzimas de restricción.
Después de dicha digestión, el aproximadamentemillón de fragmentos de ADN obtenidos, se separan entre sí, según su tamaño, en un gel de agarosa, sometido a un campo de corriente continua en una cubeta de electroforesis. El ADN posee una cargaeléctrica negativa por lo que se desplaza hacia el polo positivo. Los fragmentos más pequeños se desplazan a mayor velocidad que los más grandes.
Con la electroforesis convencional se separan fragmentosentre 100 y 30.000 pares de bases. Cuando se marca con un colorante fluorescente (bromuro de etidio), el ADN separado de esta forma, aparece como una mancha homogénea de material fluorescente debido aque existen demasiados fragmentos de ADN como para que puedan diferenciarse entre sí.
La técnica de Southern Blotting permite identificar uno o dos fragmentos de ADN de interés en el aparentementeuniforme colección de millón de fragmentos cortados con la enzima de restricción. El siguiente paso consiste en la desnaturalización de los fragmentos de cadena doble para obtener fragmentos de cadenaúnica. Esto se logra con un bufer de Ph básico.
La molécula de cadena única es transferida desde el gel a una membrana de nilón o a papel de nitrocelulosa, ayudado por capilaridad. La identificaciónde uno o más fragmentos de interés se logra con una sonda específica marcada con radioactividad o colorimetría.
La sonda marcada se incuba con el filtro de nilón o nitrocelulosa...
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