cultivo invitro de hojas

PRACTICA Nº 4
CULTIVO IN VITRO DE HOJAS
INTRODUCCION
Fragaria x ananassa, llamada comúnmente, fresa de huerto, fresón o frutilla híbrida y sus cultivares emparentados es la más común variedad de Fragaria cultivada mundialmente. Las variedades de frutilla varían fuertemente en tamaño, color, sabor, forma, grado de fertilidad, estación de maduración, sensibilidad a enfermedades, constituciónde la planta. Algunas varían en follaje, en el desarrollo relativo de sus órganos sexuales. En muchos casos, las flores parecen hermafroditas en estructura, pero funcionan tanto como macho o hembra.
Germinación de semillas
Las semillas de Fragaria x Ananassa demoran aproximadamente quince días en germinar pero esto sólo sucede en el 20% de la cantidad total semillas puestas a germinar.MicropropagaciónLa fresa es un vegetal que puede vivir por mucho tiempo; sin embargo, se mantiene en producción económicamente rentable, durante los primeros dos años. En plantaciones de mayor edad, las plantas se muestran débiles, con bajo rendimiento y frutos de menor calidad, debido a una mayor incidencia de plagas y enfermedades. Por ser una planta híbrida, no se utilizan sus semillas para propagarla.Su sistema de crecimiento y formación de nuevas coronas y estolones permite una propagación vegetativa rápida y segura. Esta planta normalmente se propaga por estolones, obtenidos de plantas madres que han estado sometidas a largos períodos de frigoconservación, característica que estimula un gran crecimiento vegetativo cuando son llevadas al campo.
Se dice que la adecuación de nuevastecnologías para el cultivo de la fresa, presenta inconvenientes por su falta de difusión y uso. La dificultad que afrontan los trabajos de mejoramiento convencional en esta especie, son básicamente la lentitud y los altos costos, ya que se requieren entre 10 a 15 años para la creación de una nueva variedad. Una alternativa de solución a estas limitaciones, son las técnicas de cultivo in vitro, que permitenla propagación clonal rápida de un gran número de plantas. De aquí que muchos investigadores se han dedicado a la implementación de las mismas, en vistas a mejorar el cultivo de la fresa.
Establecimiento aséptico del cultivo in vitro:
Una vez seleccionado el mejor explante se requiere desinfectarlo superficialmente, porque en el medio de cultivo pueden crecer microorganismos, principalmentebacterias y hongos, que competirán ventajosamente con el explante. La selección y concentración de los desinfectantes y el tiempo de desinfección se determinan, en gran medida, por las características del explante.
El explante debe responder eficientemente bajo las condiciones in vitro, sin embargo se debe considerar el hecho que el aislamiento de un tejido u órgano del resto de la planta provoca unestado de estrés que altera su metabolismo celular y, en forma importante, su balance hormonal. Un buen explante es aquel cuyas células sobreviven, en una alta proporción y que luego responde eficientemente a las condiciones in vitro.
MATERIAL Y METODOS
Preparación para el cultivo in vitro:
Los instrumentos como pinzas y bisturíes se envuelven en papel craft antes de ser sometidos a laesterilización en el autoclave.
La cristalería, además de poder ser esterilizada en autoclave, también puede ser esterilizada por calor seco en una estufa a 150ºC durante 2 o 3 horas.
La superficie de la mesa de trabajo, paredes y techo de la cámara de flujo laminar deben limpiarse con un paño humedecido con Hipoclorito de sodio al 2.5% y después con etanol al 70%.
Encender la cámara de flujo laminary colocar el mechero Bunsen, 15 minutos, antes de iniciar el trabajo.
Evitar la interrupción o inversión del flujo de aire.
El operador debe llevar una bata de laboratorio limpia, además debe lavarse las manos y brazos con jabón carbólico y después con etanol al 70%.
Introducir todos los materiales necesarios para el cultivo in vitro en la cámara de flujo laminar, previamente esterilizados...