curva estandar

Curvas Estándar y Concentración
Objetivos:
Aprender a realizar y utilizar curvas estándar para determinar concentraciones específicas de soluciones desconocidas
Conocer y utilizar las diferentesformas de calcular concentraciones
Materiales:
1. Micropipetas
2. Espectrofotómetro
3. 15 Tubos de ensaye de 10 ml
4. 2 Pipetas de 5 ml
5. Solución de BSA 0.5 mg / ml
6. Solución A (proteínade concentración desconocida)
7. Solución B (proteína de concentración desconocida)
8. Reactivo Bradford
Método:
Parte 1. Curva Estándar de Agua
1. Utilizar la balanza analítica, micropipetas (ojeringas de insulina) y agua destilada para realizar una de las siguientes curvas estándar
Opción 1:
Opción 2:
Opción 3:
Opción 4:





2. Avisar a la profesora que les pondrá en la balanzauna cantidad de agua desconocida para los alumnos
3. Realizar una curva estándar y por medio de la ecuación de la recta, extrapolar los valores de peso obtenidos para las cantidades de aguadesconocidas y determinar así estos valores.

Parte 2. Curva de Proteína por el método de Bradford
1. Preparar los siguientes tubos. Para la curva estándar (tubos 1 al 5) se utiliza una solución de 0.5 mg /ml de albúmina sérica bobina (BSA). Para los tubos problema (8, 9, 10 y 11) se utilizan las soluciones de concentración desconocida (A y B).

Tubo
µl de BSA
µl de H2O
ml de Buffer Bradford
A5951
0 µl
300 µl
3 ml

2
30 µl
270µl
3 ml

3
60 µl
240 µl
3 ml

4
90 µl
210 µl
3 ml

5
120 µl
180 µl
3 ml

6
150 µl
150 µl
3 ml

7
300 µl
0 µl
3 ml






8ProblemaA 25 µl
275 µl
3 ml

9
ProblemaA 50 µl
250 µl
3 ml

10
ProblemaA 75 µl
225 µl
3 ml

11
ProblemaB 30µl
270 µl
3 ml

12
Problema B 200 µl
100 µl
3 ml

13
Problema B300 µl
0 µl
3 ml


2. Leer la A595 y anotar los datos
3. Calcular los µg de BSA que corresponden a las cantidades utilizadas en la curva estándar
4. Realizar la curva estándar (µg de BSA en el...