Determinación cuantitativa colorimétrica enzimática de triglicéridos en suero o plasma











Determinación cuantitativa colorimétrica enzimática de triglicéridos en suero o plasma






1. Objetivo

Determinar la concentración de los triglicéridos en el suero.
2. INTRODUCCIÓN

a) Triglicéridos
Los triglicéridos, denominados también triacilgliceroles, tripalmitinas son lípidos que están formados por tres moléculas de ácidos grasos y una molécula dealcohol: el glicerol. Estos lípidos en parte se obtienen de la dieta, sin embargo en muchos tejidos, especialmente en hígado y en tejido adiposo
se produce la síntesis de triglicéridos a partir de carbohidratos (se forman por reacción de dos moléculas de acil-CoA grasos conglicerol-3-fosfatopara producir ácido fosfatídico, que se desfosforila a diacilglicerol, que es seguidamente  acilado  por  una tercera molécula de acil-CoA, produciendo finalmente el triglicéridos, mediante la enzima glicerofosfato aciltransferasa). El  tejido  adiposo  está  especialmente diseñado  para  la  síntesis,  almacenamiento  e  hidrólisis  de triglicéridos. Siendo este el mecanismo principal que tiene el cuerpo para el almacenamiento de energía a largo plazo, también se produce almacenamiento en el músculoesquelético y cardíaco, sólo para consumo local. La síntesis de triglicéridos en el hígado se utiliza principalmente para la producción de lipoproteínas sanguíneas.
b) Lipoproteínas sanguíneas
Son macromoléculas compuestas por lípidos y proteínas, encargadas del transporte de lípidos a través del cuerpo humano. Su función es envolver los líquidos insolubles en el plasma provenientes de:losalimentos(exógenos) y los sintetizados por nuestro organismo (endógenos), que son transportadosdesde el intestino y el hígado a los tejidos periféricos y viceversa; devolviendo el colesterol al hígado para su eliminación del organismo en forma de ácidos biliares. Más del 95% de todos los lípidos del plasma está en forma de lipoproteínas, que son pequeñas partículas muchos más pequeñas que los quilomicronespero de una composición similar desde el punto de vistacualitativo. Los lípidos no pueden movilizarse en los fluidos corporales debido a su naturaleza hidrofóbica. Por ello, para permitir su transporte en el organismo, son combinados con proteínas llamadas betaglobulinas para formar lipoproteínas
.Una vez que los lípidos han sido absorbidos a través del intestino, se combinan en el plasmasanguíneo con cadenas de polipéptidos para producir una familia de lipoproteínas distinta, las que son clasificadas en función de su densidad, determinada mediante centrifugación. Como los lípidos son mucho menos densos que las proteínas, se observa una relación inversa entre el contenido de lípidos y su densidad; por ejemplo, un alto contenido de lípidos significa partículas de baja densidad.
OBTENCIÓNDE TRIGLICÉRIDOS:

Vía exógena

Obtención de triglicéridos a través de la dieta y absorción de monoacilgliceroles a nivel del intestino.

Vía endógena

Obtención por biosíntesis tanto en el hígado (síntesis de VLDL) como en el tejido adiposo (síntesis y degradación)
































Desarrollo

Primero mediante una punción venosa se debeobtener una muestra sanguínea con un tubo bacutainer amarillo.
Posteriormente se meterá el tubo a la centrifuga para separar el suero del plasma.
Una vez separados el suero y el plasma se tiene con ayuda de una pipeta Pasteur pasar el plasma a un tubo de ensayo.
Como los reactivos para esta prueba no vienen listos para su uso se tiene que crear un reactivo de trabajo el cual se obtieneadicionando 50 micro litros del reactivo a cada 5 mililitros de buffer y mantenerlo a temperatura ambiente durante 15 minutos como mínimo antes de utilizarlo.
Para el reactivo blanco se colocaran en un tubo de ensaye un mililitro del reactivo.
Para el estándar se colocara en un tubo de ensaye un mililitro de reactivo y 0.01 mililitros de estándar.
Para la muestra se colocaran en un tubo de...