Determinación de micorrización en raíces mediante diferentes métodos

Determinación de micorrización en raíces mediante diferentes métodos
Julie Ramírez

Resumen: Se evaluaron cuatro métodos para la determinación de micorrización, el método de Giovanetti & Mosse (1980), de Trouvelot et al. (1080), Sieverding (1983) y McGonigle et al. (1990). Se compararon encontrando sus principales limitantes, ventajas y desventajas que deben tenerse en cuenta a la hora deelegir alguno de ellos para analizar una muestra.
Palabras clave: Colonización, micorriza, Arbuscular, simbiosis.

Introducción
Los hongos de micorriza arbuscular son simbiontes obligados de plantas, la simbiosis entre los dos organismos se da en el suelo donde se asocia el hongo con la raíz de la planta. Esta relación ha sido estudiada dada su importancia, pues estos hongos pueden aportarbeneficios a sus hospederos y determinar el éxito del mismo en un ambiente determinado. Para la investigación de esta relación se han desarrollado muchas técnicas y métodos para la detección de la colonización de las raíces (Vierheilig et al. 2005), pues esto es necesario para verificar que existe una asociación funcional evidenciada mediante la estructura funcional, el arbúsculo (Utobo et al. 2011).Para medir la colonización en raíces existen varios métodos, dentro de los cuales se destacan el método de Giovanetti & Mosse (1980) para la cuantificación de la longitud de raíz micorrizada y el porcentaje de colonización, el método de Trouvelot et al. (1986) para cuantificar la colonización intrarradical determinando frecuencia, intensidad y abundancia (%), el método de Sieverding (1983) parahallar el porcentaje de micorrización, y el método Mcgonigle et al. (1990) para hallar micorrización total, colonización arbuscular, vesículas e hifas (%).
Cada método cuenta con unas características singulares, ventajas y desventajas. Es el objetivo de este manuscrito analizar y comparar los diferentes métodos mencionados.
Materiales y métodos
Método de Giovanetti & Mosse (1980)cuantificación de la longitud de raíz micorrizada: Se contó con una raíz, de la cual se tomó una porción para ser procesada, aclarada y teñida para la observación de micorrización, ambos fragmentos fueron pesados en fresco. El fragmento de raíz que no se procesó fue secado y pesado (peso seco).
La raíz procesada se dispuso distribuyendo las ramificaciones lo más homogéneamente posible en una caja de Petri conuna cuadrícula dibujada en el fondo (donde cada cuadro tenía 1cm2 de área). Usando un estereoscopio se contaron las intersecciones de las raíces (diferenciando entre secciones de raíz colonizadas y no colonizadas) con las líneas verticales y horizontales de la caja. Posteriormente se realizan los siguientes cálculos:
1. DW3= DW1+ DW2
Donde.
DW3= Peso seco total de la muestra
DW1= Peso seco dela raíz no procesada
DW2= Peso seco de la raíz procesada
2. R3= P2*R1
Dónde:
R3= Longitud total de la muestra
P2= porción de peso seco de la muestra procesada: P2= DW3/DW2
R1= Suma de todos las intersecciones contadas
3. R4= P2*R2
Donde:
R4= longitud de la raíz micorrizada
R2= número de intersecciones de raíz micorrizada
4. % de micorrización = R2*100/ R1
Método de Sieverding (1983):Se contó con un fragmento de raíz procesada (teñida) cortada en fragmentos de aproximadamente 2 cm de longitud dispuestos de forma paralela y verticalmente sobre una lámina portaobjetos, a los cuales se les aplicó PVGL y se cubrieron con laminilla cubreobjetos. Se marcaron 5 transectos horizontales en la lámina y se evaluó la colonización en cada campo con raíz a lo largo de cada transecto porpresencia o ausencia con ayuda de microscopio usando el objetivo de 10X y de mayores aumentos en casos que requerían confirmación de estructuras de micorriza. Se contaron los campos donde se observó micorrización y en los que no, hallando el número total de campos observados. Después se calculó el porcentaje de micorrización mediante la siguiente fórmula:
% micorrización= (No. De campos...