Determinación espectrofotométrica de proteínas
Páginas: 4 (915 palabras)
Publicado: 3 de junio de 2014
Determinación espectrofotométrica de proteínas
Fundamento teórico
El objetivo experimental es medir la absorción de luz por muestras problema para determinar la cantidad de proteína contenidaen una muestra de leche. Para ello se utilizara un método colorimétrico cuyo fundamento teórico esta explicado en la práctica anterior.
Proteínas en la leche y reacción de color
La caseína esla principal proteína de la leche y se encuentra dispersa como un gran número de partículas sólidas tan pequeñas que no sedimentan, y permanecen en suspensión. Estas partículas se llaman micelas y ladispersión de las mismas en la leche se llama suspensión coloidal.
La reacción de color para medir la concentración de proteínas solubles por espectrofotometría se basa en la formación de complejosentre el ión cúprico y dos cadenas poli peptídicas contiguas que tengan al menos dos enlaces peptídicos sucesivos.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de cobre (II) y sosa, y el Cu, en un mediofuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.
Esta reacción laproducen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (-CO-NH-) que se destruye al liberarse los aminoácidos. Cuando una proteína se pone encontacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, de fórmula: que, en contacto con una solución de sulfato cúprico diluida, da una coloración violeta característica.Protocolo experimental
AVISO IMPORTANTE: No se debe pipetear nunca con la boca, se debe usar siempre el pipeteador adecuado y mantener las pipetas limpias.
1. Preparación de la curvade calibración
Se preparan soluciones patrón realizando diluciones seriadas de una solución madre, ya preparada, de la proteína albúmina de suero bovina (BSA) de 10 mg/mL utilizando tubos de...
Fundamento teórico
El objetivo experimental es medir la absorción de luz por muestras problema para determinar la cantidad de proteína contenidaen una muestra de leche. Para ello se utilizara un método colorimétrico cuyo fundamento teórico esta explicado en la práctica anterior.
Proteínas en la leche y reacción de color
La caseína esla principal proteína de la leche y se encuentra dispersa como un gran número de partículas sólidas tan pequeñas que no sedimentan, y permanecen en suspensión. Estas partículas se llaman micelas y ladispersión de las mismas en la leche se llama suspensión coloidal.
La reacción de color para medir la concentración de proteínas solubles por espectrofotometría se basa en la formación de complejosentre el ión cúprico y dos cadenas poli peptídicas contiguas que tengan al menos dos enlaces peptídicos sucesivos.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de cobre (II) y sosa, y el Cu, en un mediofuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.
Esta reacción laproducen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (-CO-NH-) que se destruye al liberarse los aminoácidos. Cuando una proteína se pone encontacto con un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, de fórmula: que, en contacto con una solución de sulfato cúprico diluida, da una coloración violeta característica.Protocolo experimental
AVISO IMPORTANTE: No se debe pipetear nunca con la boca, se debe usar siempre el pipeteador adecuado y mantener las pipetas limpias.
1. Preparación de la curvade calibración
Se preparan soluciones patrón realizando diluciones seriadas de una solución madre, ya preparada, de la proteína albúmina de suero bovina (BSA) de 10 mg/mL utilizando tubos de...
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