Determinacion de proteinas

DETERMINACION DE PROTEINAS POR EL METODO DE LOWRY La determinación cuantitativa de la concentración de proteínas es una de las pruebas que mas frecuentemente deben hacerse en el laboratorio debioquímica. Primitivamente, la cantidad de proteínas se evaluaba midiendo la cantidad total de nitrógeno proteico, y teniendo en cuenta que este elemento representa aproximadamente el 16% del peso de unaproteína. Este era un método largo y laborioso y con poca sensibilidad. La aparición de métodos calorimétricos ha permitido solventar estos dos inconvenientes. Entre los métodos calorimétricos destacantres: el método de Biuret, el método de Lowry y el método de Azul de Coomasie. En esta práctica nos ocuparemos únicamente del segundo de ellos. Tiene la ventaja de ser extremadamente sensible, capaz dedetectar cantidades del orden de 10 microgramos de proteína; su inconveniente principal es que al evaluar, como veremos, los fenoles presentes en la proteína (esencialmente residuos de tiroxina), laintensidad del color resultante varia entre las distintas proteínas. Pero cuando tratamos con mezclas biológicas complejas, podemos perfectamente calibrar el método con alguna proteína comercial, comoes la seroalbumina bovina. La reacción que tiene lugar en el metodote Lowry es bastante compleja y no del todo conocida. Se desarrolla en las siguientes fases: 1.-Reacción previa de la proteína enmedio alcalino con iones Cu2+, en presencia de tartrato para evitar la precipitación. Es esencialmente idéntica a la reacción del Biuret, formándose un complejo de coordinación entre el cobre y elnitrógeno peptídico. 2.-Reacción con el reactivo de Folin-Ciocalteau para fenoles (ácido fosfomolibdotungstico), que se reduce por medio de los grupos fenol (y en menor medida imidazol e indol) presentes enla proteína a un complejo de color azul oscuro, que se mide colorimétricamente. El complejo coloreado, cuya composición es desconocida, presenta dos máximos de absorción a las longitudes de onda...