Determinacion de Lipidos



Práctico N° 2. Determinación de lípidos (métodos Soxlhet y Bligh-Dyer)


Método de Bligh-Dyer:

- Se debe determinar la humedad de la muestra para mantener la relación de cloroformo,metanol y agua en las diferentes etapas del análisis
En este método es indispensable ajustar la humedad de la muestra a 80% +/- 1%, pues las relaciones de volúmenes de cloroformo, metanol y agua,presentes en la muestra, deben ser de 1 : 2 : 0,8 y de 2 : 2 : 1,8 después de la dilución.
- Si el contenido de humedad de la muestra es mayor o igual que 80%, pesar 10 gramos (leche en polvo) o tomar 10 ml(leche líquida) y llevar a un vaso precipitado de 250 ml limpio y seco (Nota 1).
- Si el contenido de humedad de la muestra es menor que 80%, hacer una pasta homogenea de la leche con la cantidad deagua calculada (Nota 2). Pesar 10 g de esta pasta en un vaso pp. de 250 ml.
- Agregar 10 ml de cloroformo y 20 ml de metanol.
- Extraer, utilizando un agitador magnético, durante 10 minutos.
-Agregar 10 ml de cloroformo y homogeneizar durante 5 minutos.
- Agregar 10 ml de agua y volver a homogeneizar por 5 minutos.
- Centrifugar a 4000 rpm.(con temperatura de refrigeración) durante 20-25min. Alternativamente se puede filtrar a través de un embudo Büchner con papel Whatmann Nº 1, con ligero vacío.
- Transferir cuantitativamente el líquido a una probeta de 100 ml (limpia y seca) lavandoel vaso que contenía la muestra con 10 ml de cloroformo que se vierten también en la probeta.
- Dejar reposar la mezcla cloroformo-metanol-agua hasta que se observe una completa separación de dosfases.
- Leer el volumen de la fase clorofórmica (inferior).
- Retirar la capa metanol-agua (superior) por aspiración con una pipeta, extrayendo también un pequeño volumen de la capa clorofórmica paraasegurar una completa remoción de la capa superior.
- Tomar una alícuota de 10 ml de la fase clorofórmica y llevar a un recipiente previamente tarado.
- Evaporar el cloroformo a 40ºC en un baño...