Determinación de Microorganismos Ambientales

Microbiología Ambiental

Ramos Carrión Laly.

Efio Quezada Wilberto.

III

MANUAL DE LABORATORIO - Versión 2015

DETERMINACIÓN DE MICRORGANISMOS AMBIENTALES MEDIANTE LA TÉCNICA
DE EXPOSICIÓN EN PLACA.

I.

INTRODUCCIÓN.
La microbiología tiene una antigüedad de solo doscientos años. Los ancestros

bacterianos fueron las primeras células vivas que aparecieron sobre la Tierra. La
microbiología esimportante porque estudia la vida de los microorganismos y entre los que
vamos hablar a continuación son: los microorganismos mesófilos.
Los microorganismos mesófilos pueden vivir entre un rango de temperatura de 30° hasta
40°C. Entre los microorganismos mesófilos tenemos a los hongos y a las bacterias: Las
bacterias son microorganismos con una célula única (unicelulares) relativamente simples
dadoque su material genético no está encerrado por una membrana nuclear especial, las
células bacterianas se denominan procariotas de las palabras griegas que significan pre
núcleo. Los procariontes incluyen las bacterias y Archea. Las células bacterianas suelen
presentar diversas formas: bacilos (son a bastonadas). Asimismo las bacterias individuales
pueden formar pares, cadenas, racimos u otrosagrupamientos. Por otro lado los hongos son
eucariontes, cuya célula poseen un núcleo diferenciado que contiene el material genético de
la célula, rodeada por una cubierta denominada membrana nuclear. Estos microorganismos
pueden ser unicelulares o multicelulares. También tenemos que los hongos verdaderos están
compuestos por quitina en su pared celular. Las levaduras son microorganismos ovales másgrandes que las bacterias. Su reproducción puede ser de forma sexual y asexual.
La determinación de microorganismos mesofilos aerobio, es muy importante realizar en
un medio ambiente, ya que esto ayuda a definir el grado de contaminación de dicho lugar. A
continuación se estará detallando como determinar la cantidad de microorganismos
mesófililos aerobios en un determinado ambiente mediante latécnica de exposición en placa
Petri con los nutrientes de RBC (Rosa Véngala Cloranfenicol) Y PCA (Agar Cuenta Colonia).

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II.

OBJETIVOS.
2.1. Objetivo general
 Determinar la cantidad de microorganismos mesófililos aerobios en un
determinado ambiente.
2.2. Objetivo específicos
 Determinar las características de los microorganismos mesófilos.
 Cuantificar losmicroorganismos mesófilos de las muestras de cultivo de PCA y
PBC.

III.

EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO.
3.1. Materiales.
 Placas Petri
 Algodón
 Alcohol
 Agua destilada
 Erlenmeyers de 100 ml
 Pipeta
 Papel kraft
 Pinza de papel

3.2. Equipos.
 Cocina
 Autoclave
 Incubadora
 Horno esterilizador
 Cuenta colonias
 Nevera
3.3. Medios de Cultivo.
 PCA (Bacterias)
 RBC (Hongos)Escuela de Ingeniería Ambiental

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IV.

PROCEDIMIENTO

4.1. Esterilización de materiales
 Se escoge 12 placas Petri.
 Se empieza a limpiar cada una de ellas con algodón y alcohol.
 se envuelve con papel crakc.
 Llevar al horno esterilizador y dejarlo a una temperatura de 170 °C por 1 hora y 40
minutos.
4.2. Preparación de medios de cultivos.
Calcular la cantidad de RBC y PCA para realizar una mezcla con el agua destila.
Si 31.6 g de RBC es para 1000 ml de H2O destilada y 22 g es para 1000 ml de
H2O destilada.


Para RBC
31.6 g de RBC

1000 ml.

X

200ml.

𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑅𝐵𝐶 =

31.6 𝑔 𝑋 200𝑚𝑙
1000𝑚𝑙

Cantidad de RBC = 6.32 g


Para RCA
22 g de RCA

1000 ml.

X

200ml.

𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑅𝐶𝐴 =

22 𝑔 𝑋 200𝑚𝑙
1000𝑚𝑙

Cantidad de RCA = 4.5 g
 Luegoen un primer matraz agregar los 6,32 g de RBC más 200 ml de H2O
destilada y agitar hasta que la concentración se disuelva.
 Asimismo en un segundo matraz agregar los 4,5 g de PCA más 200 ml de H2O
destilada y agitar hasta que la concentración se disuelva.
 finalmente con algodón sellar el pico del matraz.

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