Determinación De Poteinas

Determinación De Proteínas

OBJETIVO: Determinar el contenido de nitrógeno orgánico, expresado como proteína en una muestra de alimento( croqueta de perro Pedigree adulto).

ANTECEDENTES:

Las proteínas son los pilares fundamentales de la vida. El cuerpo necesita proteína para repararse y mantenerse a sí mismo. La estructura básica de una proteína es una cadena de aminoácidos.

FuncionesCada célula en el cuerpo humano contiene proteína. La proteína es una parte muy importante de la piel, los músculos, órganos y glándulas. La proteína también se encuentra en todos los líquidos corporales, excepto la bilis y la orina.
Uno necesita proteína en la dieta para ayudarle al cuerpo a reparar células y producir células nuevas. La proteína también es importante para el crecimiento y eldesarrollo durante la infancia, la adolescencia y el embarazo.

En el trabajo de rutina se determina mucho más frecuentemente la proteína total que las proteínas o aminoácidos individuales. En general, el procedimiento de referencia Kjeldahl determina la materia nitrogenada total, que incluye tanto las no proteínas como las proteínas verdaderas (Aurand et al, 1987)

El método se basa en ladeterminación de la cantidad de Nitrógeno orgánico contenido en productos alimentarios, compromete dos pasos consecutivos:

a) La descomposición de la materia orgánica bajo calentamiento en presencia de
ácido sulfúrico concentrado.
b) El registro de la cantidad de amoniaco obtenida de la muestra

Durante el proceso de descomposición ocurre la deshidratación y carbonización de la materia orgánicacombinada con la oxidación de carbono a dióxido de carbono. El nitrógeno orgánico es transformado a amoniaco que se retiene en la disolución como sulfato de amonio. La recuperación del nitrógeno y velocidad del proceso pueden ser incrementados adicionando sales que abaten la temperatura de descomposición (sulfato de potasio) o por la adición de oxidantes (peróxido de hidrógeno, tetracloruro,persulfatos o ácido crómico) y por la adición de un catalizador. (Nollet, 1996)

El método de Kjeldahl consta de las siguientes etapas:

a) Digestión Proteína + H2SO4 Q CO2 + (NH4)2SO4 + SO2

b) Destilación

(recibiendo en HCl) (NH4)2SO4 + 2NaOH Q Na2SO4 + NH3 X+ H2O

(recibiendo en H3BO3) NH3 + H3BO3 Q NH4H2BO3

c) Titulación
(si se recibió en HCl)NH4Cl + HCl + NaOH Q NH4Cl + NaCl + H2O
(si se recibió en H3BO3) NH4H2BO3 + HCl Q H3BO3 + NH4Cl

En la mezcla de digestión se incluye sulfato sódico para aumentar el punto de ebullición y un catalizador para acelerar la reacción, tal como sulfato de cobre. El amoniaco en el estilado se retiene o bien por un ácido normalizado y se valora por retroceso, o en ácido bórico yvalora directamente. El método Kjeldahl no determina, sin embargo, todas las formas de nitrógeno a menos que se modifiquen adecuadamente; esto incluye nitratos y nitritos. (Pearson, 1993)

Para convertir el nitrógeno a proteína se emplea el factor de 6.25 el cual proviene de la consideración de que la mayoría de las proteínas tienen una cantidad aproximada de 16% de nitrógeno.

f=100 gramos deproteina16 gramos de nitrogeno=6.25

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS.

Materiales.
• Vaso de precipitado de 50, 100, 500 y 1000 mL.
• Espátula.
• Matraz Kjeldahl de 800 mL o tubos de digestión Labconco que apliquen al equipo
digestor.
• Perlas de vidrio.
• Probeta de 25, 50, 100 y 500 mL
• Matraz Erlenmeyer de 250 y 500 mL.
• Soporte Universal.
• Pinzas para Bureta.
• Bureta de 25 y50 mL.
• Agitador magnético.
• Vidrio de reloj.
• Pipeta graduada de 10 mL.
• Matraz volumétrico de 1L.
• Gotero.
• Perilla de succión o accesorio similar.
• Pizeta.
• Guantes resistentes a altas temperaturas.
• Frascos con tapa de plástico.
• Desecador y sílica gel con indicador.

Equipos.
• Homogenizador de muestras de laboratorio manual, mecánico o eléctrico.
• Balanza analítica...