Detrminacion proteina

INSTITUTO DE SALUD PUBLICA DE CHILE SUBDEPARTAMENTO LABORATORIOS DEL AMBIENTE

SECCION QUÍMICA DE ALIMENTOS PRT-701.02-150 Rev N°: 0 Pág: 1 de 2

DETERMINACIÓN DE PROTEINAS Método Kjeldahl 1.- OBJETIVO

Determinar la concentración de nitrógeno presente en la muestra para luego ser transformado a través de un factor en proteína. 2.- ALCANCE Y CAMPO DE APLICACIÓN El método es aplicable aalimentos en general. 3.-FUNDAMENTO El método se basa en la destrucción de la materia orgánica con ácido sulfúrico concentrado, formándose sulfato de amonio que en exceso de hidróxido de sodio libera amoníaco, el que se destila recibiéndolo en: a) Acido sulfúrico donde se forma sulfato de amonio y el exceso de ácido es valorado con hidróxido de sodio en presencia de rojo de metilo, o b) Acido bóricoformándose borato de amonio el que se valora con ácido clorhídrico. 4.- REFERENCIAS 4.1.- A.O.A.C. Official Methods of Analysis 13 th Edition, 1984. 4.2.- FAO Food and Nutrition Paper 14/7 Roma, 1986 5.- TERMINOLOGIA N/A 5.- MATERIAL Y EQUIPO 5.1.- Balanza analítica, sensibilidad 0.1 mg. 5.2.- Equipo Kjeldahl 5.3.- Manto calefactor 5.4.- pHmetro 5.5.- Material usual de laboratorio. 6.- REACTIVOS6.1.- Acido sulfúrico concentrado, p.a. 6.2.- Sulfato de potasio o sulfato de sodio, p.a. 6.3.- Sulfato cúprico, p.a. 6.4.- Solución de hidróxido de sodio al 15 % . Disolver 150 g de NaOH y completar a 1 litro. 6.5.- Solución de ácido sulfúrico 0.1 N. Tomar 2.7 mL de H2SO4 conc. y completar a 1 litro, luego estandarizar con Na2CO3 anhidro p.a. 6.6.- Solución de hidróxido de sodio al 30 %. Disolver300 g de NaOH y completar a 1 litro. 6.7.- Solución indicadora de rojo de metilo al 1 % en etanol. Disolver 1 g de rojo de metilo en 100 mL de etanol (95 %).

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PRT-701.02-150 DETERMINACIÓN DE PROTEINAS Rev N°: 0 Pág: 1 de 2 Método Kjeldahl 6.8.- Solución de hidróxido de sodio 0.1 N.Tomar 4 g de NaOH y enrasar a 1 litro con agua recientemente hervida y enfriada. Valorar con ácido succínico. 6.9.- Acido bórico al 3 % . Disolver 30 g de ácido bórico y completar a 1 litro.

6.10.- Indicador de Tashiro: rojo de metilo al 0.1 % y azul de metileno al 0.1 % en relación de 2:1, en alcohol etílico. 6.11.- Solución de ácido clorhídrico 0.1 N. Tomar 8.3 mL de HCl conc. y enrasar a 1litro. Valorar con Na2CO3 anhidro. 7.- PROCEDIMIENTO 7.1.- Realizar la muestra en duplicado. 7.2.- Efectuar un ensayo en blanco usando una sustancia orgánica sin nitrógeno (sacarosa) que sea capaz de provocar la reducción de los derivados nítricos y nitrosos eventualmente presentes en los reactivos. 7.3.- Pesar al 0.1 mg. alrededor de 1 g de muestra homogeneizada (m) en un matraz de digestiónKjeldahl. 7.4.- Agregar 3 perlas de vidrio, 10 g de sulfato de potasio o sulfato de sodio, 0.5 g de sulfato cúprico y 20 mL de ácido sulfúrico conc. 7.5.- Conectar el matraz a la trampa de absorción que contiene 250 mL de hidróxido de sodio al 15 %. El disco poroso produce la división de los humos en finas burbujas con el fin de facilitar la absorción y para que tenga una duración prolongada debe serlimpiado con regularidad antes del uso. Los depósitos de sulfito sódico se eliminan con ácido clorhídrico. Cuando la solución de hidróxido de sodio al 15 % adicionada de fenolftaleína contenida en la trampa de absorción permanece incolora debe ser cambiada (aprox. 3 análisis ). 7.6.- Calentar en manta calefactora y una vez que la solución esté transparente, dejar en ebullición 15 a 20 min. más. Si lamuestra tiende a formar espuma agregar ácido esteárico o gotas de silicona antiespumante y comenzar el calentamiento lentamente. 7.7.- Enfriar y agregar 200 mL de agua. 7.8.- Conectar el matraz al aparato de destilación, agregar lentamente 100 mL de NaOH al 30 % por el embudo, y cerrar la llave. 7.9.- Destilar no menos de 150 mL en un matraz que lleve sumergido el extremo del refrigerante o...