Diagnostíco de Patologia por RT y PCR

Diagnostico de Enfermedades (IPNv, BKD, ISAv) por Técnica de PCR

4.2.1.1.- TOMA DE MUESTRA
Los implementos y materiales de trabajo requeridos para la toma de muestras, son abastecidos en su totalidad por el laboratorio, asegurando de esta manera una buena esterilización y cuidado de la higiene.
En terreno solo se realiza la toma de las muestras en forma individual para cada reproductor,quedando la confección de pooles y cualquier otro manejo que requieran las muestras, restringido al laboratorio. Cada muestreo se registra en la “Planilla de Toma de Muestras”, donde se indica la información del centro, especie, grupo, código del reproductor, etc. La que es utilizada para registro en el laboratorio.
Cada reproductor se muestrea en forma individual. Se identifica bien cada bolsaestéril con cierre hermético (para muestras de riñón, corazón o branquia) o los tubos Eppendorf (en caso de sangre o muestras con preservantes como etanol o rna later) con un lápiz marcador resistente al agua. La información que se debe señalar es la siguiente:
• Sexo
• Número del reproductor
• Tipo de análisis

4.1.1.2.- Procedimiento de toma de muestra de tejido

- Recibir el pez colgado delos arcos branquiales, desangrado y desovado.
- El pez debe venir envuelto en una bolsa contenedora, con el fin de contener las vísceras.
- Se fijan los flancos a cada costado con ayuda de las pinzas, permitiendo que las vísceras queden a la vista.
- Hacer un corte en la zona anterior, por debajo del corazón con el fin de desprender la traquea. Y con lamano bajar las vísceras hasta la parte posterior, para dejar a la vista el riñón.
- Extraer de la zona anterior del riñón una porción en forma de rectángulo, utilizando el bisturí y la pinza, obtenida la muestra, se extrae el exceso de sangre con una toalla nova.
- Teniendo la muestra en la pinza, esta se deposita en la bolsa contenedora, que se encuentra rotulada con el número de reproductor yel tipo de análisis, estas se cierran en forma hermética procurando que no quede aire en su interior
- Colocar las bolsas contenedoras con su muestra respectiva en una caja térmica y mantenerlos a 4ºC previo a su envío. El traslado de muestras al laboratorio debe ser en una caja térmica, manteniendo la cadena de frío mediante gelpack o hielo para evitar el deterioro de las muestras y se adjunta ala caja una planilla de toma de muestras firmada por los responsables de la empresa y de Diagnotec S.A.

Figura Nº 1: Toma de muestra de riñón
Fuente: Registros de Diagnotec S.A.

4.1.1.3.- Procedimiento de toma de muestra de sangre

Al igual que en el fluido, la toma de muestra se hace con reproductores vivos que serán reutilizados, por lo tanto se cumple con el mismo procedimiento enel anestesiado y marcaje de los peces.
Para la extracción de la sangre se utilizan jeringas estériles, que son desechadas entre reproductor y reproductor.
El lugar de donde se extrae la sangre es en la parte posterior del pez (detrás de la aleta adiposa) y por debajo de la línea media aproximadamente en la tercera escama. Es en este lugar donde la jeringa se introduce de forma diagonal y seextrae la sangre, que posteriormente es trasvasijada a los tubos Eppendorf ya rotulados.

Figura Nº 2: Extracción de la muestra de sangre
Fuente: Registros de Diagnotec S.A.

4.2.2.- Muestras Utilizadas en el Laboratorio
4.2.2.1.- Tejidos: En el laboratorio se utilizan 3 tipos de muestras de tejido; Riñón, Corazón Y branquias.
El riñón se divide en 3 partes, riñón anterior (utilizado paraanálisis de IPNv, BKD, SRS), Riñón Medio (Utilizado para Análisis de ISAv) y Riñon posterior (utilizado para análisis de BKD por IFAT).
Este tipo de muestra tiene ventaja, ya que es aquí donde se localiza el virus o bacteria por lo tanto es mucho más fácil su detección con menos riesgos de diagnosticar falsos positivos, estas muestras pueden ser enviadas con o sin preservantes como ETANOL o RNA...