Drosophila

Colegio Eton |
Biología : Investigación Experimental |
AnaPaula Martínez Ramos-Francia |

Investigación Experimental
Nombre de la práctica: Extracción de ADN a partir de tejido vegetal
Número: 1 Fecha: 8/ 09/09 Materia: Biología Grupo: 6B
Nombre del alumno(a): Ana Paula Martínez Ramos-Francia
Nombre del profesor(a): Rosamaria Díaz-Velez

Objetivo: Extraer el ADN de unKiwi, comprendiendo el procedimento físico-químico de las moléculas y de su estructura.

Introducción:
Es possible extraer ADN de las celulas aprovechando las diferentes propiedades físico-químicas de las moléculas y de las etsructuras intracelulares.
He aquí algunas razones por las que debes llevar a cabo, con precision, cada paso de este procedimiento:
Al picar la cebolla o kiwi, estamosrompiendo las paredes celulares y dejando libre el citoplasma. Al añadir jabón líquido, rompempos la doble capa de lípidos y fosfolípidos,rompiendo las proteínas dentro la membrana. Esto libera el contenido del núcleo de la célula. Al añadir sal,minimizamos el efecto de atracción entre el ADN y las protenias aglomerando las moléculas de ADN.Al calentar la mezcla a 60°C,rompemos la cadena deADN,luego enfriamos para disminuir la rapidez de la reacción química que pudiera existir entre enzimas y el ADN (antes de que las enzimas destruyan el ADN). El filtrado separa el ADN del resto de los materiales orgánicos y finalmente,el etanol frió causa la precipitación del ADN ya que éste es insoluble al etanol frío.
Rosamaría Díaz-Vélez
Biología 2005-2006

Material/Equipo:
1. Cebolla/kiwi20.Probeta de 100cm3
2. Jabón detergente líquido 21. Soporte universal
3. Batidora 22. Agitador de vidrio
4. Agua destilada 23. balanza
5. Cuchillo 24. embudo6. Sal de mesa (3g) 25. Termómetro
7. Tabla para picar
8. Enzima proteasa(pepsina/tripsina al1%)
9. Papel filtro de café
10. Etanol a temperatura de congelador
11. Goteros
12. Baño de agua a 60°C
13. Espátula
14. Baño de agua helada
15.Jeringas de plástico de 10cm3
16. 2 vasos de ppdp. 250cm3
17. Reloj
18. Tubos de ensayo
19. Gradilla

Procedimiento:
1. Lee el procedimiento y familiarízate con lo que vas hacer, antes de empezar a trabajar.
2. Añade 3g. de sal a 10cm3 de jabón líquido el vaso de precipitados y afóralo a 100cm3 con agua destilada
3. Corta la cebolla/kiwi en pedazos pequeñitos
4. Añadeel kiwi o cebolla picando al vaso de precipitados con la solución salina de detergente y mezcla.
5. Pon el vaso de precipitados en un baño de agua a 60°C por 15 minutos(no sobrepases este tiempo)
6. Enfría la mezcla dejando el vaso de precipitados en agua helada por 5 minutos
7. Vacía la mezcla a la batidora y bate por no más de 3 Seg.
8. Con cuidado, filtra la mezcla en un segundo vasode precipitados
9. Transfiere aproximadamente 10cm3 de este filtrado a un tubo de ensayo
10. Añade 2-3 gotas de proteasa al filtrado y mezcla suavemente
11. Escurre con cuidado 10cm3 de etanol, directo del congelador, por la pared del tubo de ensayo hasta formar una capa en la superficie del filtrado. Deja reposar el tubo por unos minutos. No lo muevas
12. Observa cualquier cambio quesuceda en la interfase del alcohol y el filtrado
13. Utilizando un agitador de vidrio, con gentileza toma un poco del ADN fuera del alcohol
14. Anota tus resultados
15. Haz una preparación del ADN en un portaobjetos y colócalo en el microscopio compuesto
16. Observa tu muestra de ADN en el microscopio
17. Anota tus resultados.

Fotograma 2
Fotograma 1
Observaciones:
Fotograma 1...