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Tinciones

El microscopio de campo claro es más útil para la observación de especímenes teñidos. Los colorantes son compuestos químicos utilizados para aumentar el contraste. Existen algunos, llamados colorantes vitales, que pueden añadirse directamente a una preparación en fresco; por tanto, colorean células vivas. No obstante, la mayoría de los colorantes son solamente efectivos después deque los microorganismos hayan sido fijados, es decir, se encuentren muertos y adheridos al portaobjetos. Para la fijación por calor, se realiza una fina extensión de una gota de muestra líquida sobre un portaobjetos y se deja secar al aire; a continuación, se pasa la preparación de Forma rápida sobre la llama de un mechero. El calor de la llama mata las células microbianas por desnaturalización desus proteínas. Las proteínas coaguladas unen las células al porta. Cuando se desea fijar especímenes delicados se utiliza la fijación química, va que es menos lesiva que el calor. Para ello se añade una gota del fijador, por ejemplo, ácido ósmico, formaldehído, o glutaraldehído, sobre la muestra líquida con los microorganismos.

Algunos colorantes precipitan y se disuelven en componentescelulares, como el negro de Sudan que es liposoluble y permite distinguir los glóbulos de grasa.

La fijación posee algunos inconvenientes. Por ejemplo, a menudo distorsiona la apariencia real de las células, lo cual dificulta la identificación; además, no permite la observación del movimiento de los microorganismos. Después de la fijación, se añade el colorante, que debe permanecer el tiempo suficienteen contacto con el espécimen, para que pueda ser absorbido. A continuación, se retira el exceso de colorante, normalmente lavando con agua.

Tipos de colorantes Casi todos los colorantes son sales, compuestos formados por iones cargados. Los colorantes básicos son aquellos en los cuales el agente que tiñe es el ion cargado positivamente, mientras que en los ácidos, el colorante es el ioncargado negativamente. Los colorantes más utilizados son los de tipo básico, va que la mayor parte de las células microbianas Poseen cargas débilmente negativas en su superficie, lo cual facilita su unión. Entre los colorantes básicos más comunes se encuentran la safranina, la fucsina básica, el cristal violeta y el azul de metileno. Los colorantes ácidos se unen a las partes de las células cargadaspositivamente. Se utilizan para teñir tejidos animales infectados con microorganismos. Entre los más frecuentes están la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo.

La aplicación de diferentes colorantes según sus propiedades y las combinaciones de colorantes, mordentes y decolorantes, han permitido desarrollar tinciones que puedan agruparse en;

Tinciones simples

Tinciones diferencialesTinciones selectivas.

Las Tinciones simples: consisten en aplicar un solo colorante a ala preparación para observar la morfología de los microorganismos. Se usan principalmente colorantes básicos como el azul de metileno, cristal violeta o safranina

Las Tinciones diferenciales: consisten en aplicar una combinación de colorantes, mordentes y decolorantes que permitan poner de manifiesto algunadiferencia importante en la composición de los microorganismos. De este modo, se pueden distinguir microorganismos que aun cuando tengan igual morfología, presenten diferencias en su composición química. Las dos tinciones diferenciales mas importantes que se aplican a la bacteriología son:

Gram

Ziehl-Neslsen

Las Tinciones selectivas: Son aquellas que permiten observar un organelocelular determinado, pr que el colorante se combina selectivamente con el; en algunos casos, se requieren mordentes, agentes acidificantes o precipitantes para lograr la combinación especifioca colorante-organelo; también suelen usarse colorantes de contraste, para distinguir el resto de la celula. Las tinciones selectivas mas importantes son :

Tinción de endoesporas

Tinción de flagelos...