Efecto Del P15-Tat Sobre La Angiogenesis Y El Crecimiento Tumoral

Efecto del péptido P15-Tat sobre el crecimiento y la angiogénesis tumoral en tumores inducidos por papilomavirus (HPV)

Fernando R. Benavent Acero
Director: Dr. Hernán G. Farina Co-Director: Dr. Daniel E. Gomez

2008

SEMINARIO DE INVESTIGACIÓN

Título: Efecto del péptido P15-Tat sobre el crecimiento y la angiogénesis tumoral en tumores inducidos por papilomavirus (HPV)

Estudiante:Fernando R. Benavent Acero Director: Dr. Hernán G. Farina Co-Director: Dr. Daniel E. Gomez

Laboratorio de Oncología Molecular Departamento de Ciencia y Tecnología Universidad Nacional de Quilmes

-AGOSTO 2008-

Índice

Indice Resumen………………………………………………………………………...... II Introducción…………………………………………………………………...... -2Cáncer………………………………………………………………………........-2-Generalidades…………………………………………………………………....... -2-Protooncogenes: Oncogenes………………………………………………………… -3-Genes supresores de tumor……………………………………………………….... -4-Virus Oncogénicos………………………………………………………………..... -5-Cascada metastásica………………………………………………………………... -6-Angiogénesis………………………………………………………………………… -9-Angiogénesis Tumoral………………………………………………………………. -12HPV………………………………………………………………………............ -14-Epidemiología y características…………………………………………………......-14-Mecanismo de transformación, ciclo infectivo…………………………………....... -16Caseín Kinasa II (CK2).………………………………………………........... -21Péptido P15-Tat………………………………………………………….......... -23Objetivos………………………………………………………………………...... -26Materiales y Métodos……………………………………………………….....-28-Líneas celulares y condiciones de cultivo………………………………............... -28-Modelos animales…………………………………………………………............-29-Reactivos………………………………………………………………………....... -29-Determinación de IC50…………………………………………………............... -30-Angiogénesis in vitro…………………………………………………….............. -30-Microarreglos génicos……………………………………………………….......... -31-Inmunofluorescencia………………………………………………………........... -34-Angiogénesis in vivo…………………………………………………………......... -35-Crecimiento tumoral en ratones atímicos………………………………...............-36Resultados……………………………………………………………………...... -39-Efecto antiproliferativo del péptido P15-Tat……………………………………...... -39-Cinética de internalización y localización subcelular in vitro de P15-Tat sobre células HeLa……………………………………………………………………............... -40-Estudio de colocalización del péptido P15-Tat y el marcador nucleolar B23 mediante microscopia fluorescenteconfocal……………………………………………….......-41-Localización subcelular de CKII…………………………………………………….. -43-Modulación de la expresión génica con P15-Tat sobre paquetes génicos involucrados principalmente en apoptosis…………………………………………………………. -45-Efecto del péptido P15-Tat sobre la angiogénesis tumoral…………………………… -48-Citotoxicidad in vitro de P15-Tat……………………………………………………. -48-Efecto antiproliferativo del péptido P15-Tat…………………………………………. -48-Evaluación de la capacidad antiangiogénicain vitro del péptido P15-Tat……………. -50-Modulación de la expresión génica con P15-Tat sobre arreglos génicos involucrados en el proceso de angiogénesis………………………………………………………… -51-Determinación de la capacidad antiangiogénica in vivo del péptido P15-Tat………… -55-Evaluación del Crecimiento Tumoral………………………………………………… -57-

Discusión……………………………………………………………………….....-59Conclusiones……………………………………………………………………… -70Agradecimientos………………………………………………………………... -73Bibliografía……………………………………………………………………….. -75-

Resumen

Resumen
El desarrollo de cáncer cervical se encuentra asociado a la infección por papilomavirus humano (HPV) de alto riesgo. Estudios genéticos han

identificado a los genes E6 y E7 como los principales oncogenes virales responsables de la transformación maligna por HPV. Las oncoproteínas virales E6 y E7 interfieren con laactividad de proteínas celulares implicadas en la regulación del ciclo celular. Por su parte, la casein kinasa CK2 es una serina/treonina kinasa involucrada en la fosforilación de un conjunto de substratos intracelulares que modulan la expresión génica, el crecimiento celular y la...