Ejercicios de proteinas

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Departamento de Bioquímica Vegetal
y Biología Molecular

PROBLEMAS DE BIOQUÍMICA GRUPOS C y D Curso 2003-2004

FISICO-QUÍMICA DE PROTEÍNAS

1. Queremos separar una mezcla de tres proteínas, A, B y C. Los puntos isoeléctricos, previamente determinados, son pIA = 4.1, pIB =6.8 y pIC = 7.5 ¿Cual sería el procedimiento a seguir?

2. Predecir el orden de elución de lassiguientes proteínas cuando una mezcla de las mismas se pasa a través de una columna de Sephadex G-200 (gel con un tamaño de poro que excluye todas las proteínas con un peso molecular mayor o igual a 250.000): 1) citocromo c (PM = 13.000), 2) triptófano sintetasa (PM = 117.000), 3) hexoquinasa (PM = 96.000), 4) ATP sulfurilasa (PM = 440.000), 5) glucosa oxidasa (PM = 154.000) y 6) xantina oxidasa(PM = 300.000).
Sol.: 4 y 6 simultáneamente, y luego 5, 2, 3, 1

3. Determinar el peso molecular de una proteína sabiendo que su volumen de elución en una columna de filtración en gel es de 37 ml y el volumen vacío de la columna Vo = 20 ml. Los volúmenes de elución de patrones de PM conocido son: citocromo c (PM = 13.370), 118 ml; ß-lactoglobulina (PM = 37.100), 58 ml y hemoglobina(PM = 64.500), 24 ml.
Sol.: PM = 50.100

4. Se ha preparado una columna de Sephadex G-200 para determinar masas moleculares de proteínas. Se ha calibrado con proteínas de masa molecular conocida y se han obtenido los volúmenes de elución (Ve) que figuran en la tabla adjunta. El valor del volumen de exclusión o volumen vacío (Vo) es de 80 ml. Determinar la masa molecular de laseroalbúmina bovina si su volumen de elución relativo resultó ser Ve/Vo = 2,09.

Proteína M (kDa) Ve(ml)
Ribonucleasa 12,64 232
Mioglobina 16,9 220
Hemoglobina 64,5 170
Inmunoglobina 150 136
Fibrinógeno 339 104
Tiroglobulina 670 80
Sol.: M = 69 kDa

5. Una mezcla de hemoglobina (pI = 6,8) y dequimotripsinógeno (pI = 9,5) se sometió a electroforesis de zona. ¿En qué dirección habrán migrado estas proteínas al someterlas al campo eléctrico, a) a pH 6,8; b) a pH 8?.
Sol. a) Hb no se moverá; Qt hacia el cátodo; b) Hb hacia el ánodo; Qt hacia el cátodo.

6. Tras un proceso de purificación, se ha obtenido una preparación de un enzima puro. Sometida a cromatografíade exclusión molecular en columna de Sephadex G-100, el enzima eluyó a un Ve de 60 ml. El volumen vacío de la columna era de 30 ml, y los volúmenes de elución de distintos patrones de masa molecular conocida fueron: seroalbúmina (63 kDa), 37,5 ml; ovoalbúmina (43 kDa), 48,6 ml; quimotripsina (25 kDa), 59 ml; y mioglobina (16 kDa), 69 ml. Calcular el peso molecular de la enzima.Sol.: PM = 24.000

7. Para determinar el pI de una proteína se le somete a isoelectroenfoque en gradiente de anfolinas entre pH 5 y 9. La proteína se localizó en una banda a 8,5 cm del origen, siendo la longitud total del gel de 12 cm. Calcular el pI de la proteína.
Sol: 6,17

8. Queremos separar una mezcla de tres proteínas A, B y C, cuyos puntos isoeléctricos son pIA =5,9, pIB = 3,4 y pIC = 8,2. Diseñar un procedimiento cromatográfico y otro electroforético que permita su separación, precisando especialmente las condiciones de pH. Predecir en cada caso el resultado esperable.

9. Se ha purificado hasta homogeneidad una proteína que presenta actividad enzimática, y que en electroforesis en presencia de SDS mostraba una movilidad relativa (Rf) de 0,45. En lamisma electroforesis se pusieron los siguientes patrones: fosforilasa a (PM 96.000), Rf = 0,2; seroalbúmina (PM 67.000), Rf = 0,36; alcohol deshidrogenasa (PM 43.000), Rf = 0,56; e inhibidor de tripsina, (PM 20.000) Rf = 0,9.
Determinar el peso molecular de la proteína sabiendo que solo presenta una subunidad.
Sol.: PM = 55.000

10. Al someter una proteína de 240 kDa a...
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