Electroforesis De Proteinas

Práctica 2.
Electroforesis de Proteínas

Cuestionario.
1. ¿Cuál es el fundamento de la electroforesis en geles de poliacrilamida?
2. ¿Qué efecto tiene el SDS (dodecil sulfato de sodio) que seagrega al buffer de carga Laemmli?
3. ¿Cuáles son las características de una electroforesis en condiciones reductoras y no reductoras?
4. ¿Para qué se usan los marcadores de pesos moleculares?

Objetivo.Separar mediante electroforesis en gel de poliacrilamina proteínas de un extracto celular.

Reactivos y Materiales.
1 ml de Albumina Sérica Bovina (1mg/ml)
Buffer Laemmli 2x
Muestra de Lisado Celular2 Geles de Poliacrilamida 12%, 15 Pozos.
Marcador de Peso Molecular
200 ml de Buffer de Corrida
800 ml H2O Destilada
2 Recipientes para geles
200 ml de Azul de Coomassie
800 ml de Desteñidor deGeles
Hielo Frío
2 Embudos de vidrio
1 Probeta de 250 ml
1 Probeta 1L
1 Cámara de Electroforesis
1 Centrifuga
1 Baño María
Microtubos 0. 6 y 1.5 ml
Micropipetas 2 l, 10 l, 200 l y 1 ml.
Puntas paramicropipeta 10 l, 200 l y 1 ml.
2 Hojas de celofán dulce




Procedimiento
Preparación de la muestra.
1. Descongelar las muestras de lisado celular y prepararlas en microtubos de 0.6 l a unaconcentración final de 40 g finales por muestra. Adicionar Buffer Laemmli (8-10 l) calentar a 95C.
2. Preparar una curva de diluciones seriadas de Albúmina a partir del stock de 1mg/ml.









3.Agregar 10 ul de Buffer Laemmli 2x y calentar a 95C durante 5 min. Centrifugar.
4. Montar los geles en las cámaras correspondientes. Retirar los peines y colocar los geles en la cámara, adicionarBuffer de Corrida entre los dos geles hasta el tope y vaciar el resto a la cámara.
Cargado de la muestra
5. Se carga cada muestra en el gel, cuidando que ésta quede en un solo pozo/carril.
6. En un carrilse carga el marcador de peso molecular conocido y en los carriles siguientes las muestras de lisado celular y la curva de albúmina.
7. Se realiza la migración electroforética de las proteínas a...